小麦重要农艺性状qtl的定位

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1、2小麦农艺性状QTL的定位片段长度的差异。这一技术用放射性同位素或非放射性物质标。i已DNA片段作为同源序列探针，与转移于支持膜上的经特定限制性内切酶消化的基因组总DNA杂交，通过放射性自显影来显示酶切片段的大小，检测生物个体之间的差异。此技术首先在人类基因组作图中发展起来(Botstein等，1980)，1，以后被广泛用于植物基因组作图。各种作物包括小麦及其近缘植物的遗传作图的初期，主要是利用RFLP标记绘制遗传图谱。RFLP标记具有共显性特点，可以区别基因型纯合与杂合，能够提供单个位点上较完整的资料。它主

2、要应用于各种作物遗传连锁图的绘制和目标基因的标记。但由于RFLP标记对DNA需要量较大(5．10Lg)，所需仪器设备较多，成本高，技术较为复杂，所以应用受到了一定程度的限制(王长有等，2000)H3。1．1．1．2RAPD标记随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphismDNA，RAPD)，采用短的随机核苷酸序列引物(一般104"核苷酸左右)通过专门的PCR反应对基因组扩增而产生的多态性片段(Williamsetal，1990)岛j。小麦基因组较大(1．6X10Ⅷbp)而且染色体

3、之间具部分同源性，用随机引物扩增时易产生非特异性扩增。而且用RAPD技术所得的标记多来源于基因组的重复DNA序列，限制了将该标记转化为RFLP探针的可能，因而无法用RAPD技术来构建小麦的连锁遗传图(Devosetal，1992a)疆1。RAPD标记在基因定位(Seoetal，2001)"!、外源染色体片段检测(Kingetal，1993)

4、8j、近缘种属的起源与进化和品种J目的遗传多样性(Joshietal，1993)””等方面得到广泛的应用。另外，该方法与RFLP卡B比，有以下优点：程序相对简单，完成1个

5、过程费时少，灵敏性高。但RAPD标记是显性标记，不能区分杂合型和纯合型并且重复性差。1，1．1，3AFLP标记AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism，AFLP)即扩增片段长度多态性，是由荷兰科学家Zabeau$口Vos等(1995)‘”发展起来的分子标记技术，结合了RFLP和RAPD技术的优点。方法是将基因组DNA用两个不同的内切酶切割，然后分别与这两个酶切的粘末端互补的转接头连接，再用一个转接头的共同弓l物和另一个l-3bp的随机引物一起进行PCR扩增。由于不同材料

6、的DNA酶切片段存在差异，因而产生了扩增产物的多态性。该标记多态性高，重复性好，可以检测出任何DNA之I．自J的多念性，被广泛用于遗传多样性、遗传图谱构建和基因定位等研究。但是AFLP标记只是表示DNA片段长度的多态性，对于有些长度相同而DNA序列不同的AFLP片段在聚丙烯酰胺凝胶中则无法分离，难以准确反映基因型的多念性(王立新等·2007)⋯‘。内蒙古农业大学硕士学位论文31．1．1．4SSR标记微卫星(Microsatellites)或简单序列重复(SSR)是以1．6个碱基为基本单元的串联重复序列(Lit

7、t，1989)n21，由于这些序列在真核生物的基因组中广泛存在，加上串联重复的数目是可变的，故SSR标记呈现出高度的多念性。SSR标记呈共显性遗传：位点数量多，标记所显示的带型简单，记录的条带一致客观、明确；DNA样品的用量少，质量要求不高，以及实验程序简单等优点。因此，SSR标记已经成为目前应用最广泛的小麦分子标记。小麦的基因组存在很多重复序列，它含有A、B和D三个基因组，构成一个庞大和复杂的总基因组。每单倍体基因组含有约16000Mbp，其中80％多为重复DNA。因此在小麦基因组检测中使用简单重复序列(S

8、SR)更有效。目前有很多可利用的微卫星标记可用作小麦基因组的QTL作图和定位(R6der等，1998；Pestsova等，2000：Somers等，2004)n31鲥。Huang等(2003，2004)¨¨”使用微卫星标记和高世代回交方法从野生种发掘一些重要的农艺性状QTL并转移到栽培种中。Prasad等(2003)¨刖使用微卫星标记检测出了小麦籽粒蛋白的QTL。Li等(2006a)¨"使用70个SSR标记检测亲本周8425B、中国春和抗感池，并对F2和F3群体进行分析，在周8425B的7BL染色体上发现一个

9、显性抗条锈病基因，暂定名为YrZH84。Li等(2006b)乜们则利用819对SSR标记在川麦42的1B染色体上检测到一个显性抗条锈病基因，定名为yrC刖2。Medini等(2005)涩”利用SSR和AFLP两种标记分析突尼斯硬粒小麦和7个野生品种的差异。1．1．1。5EST—SSR标记EST(ExpressedSequenceTag，EST)，即表达序列标签，首先由美国科学家Breaner在人类基