人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞调节及蜕膜nk细胞功能分子机制

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1、万方数据万方数据朴海兰博士学位论文·扣文摘要人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞调节外周及蜕膜NI(细胞功能的分子机制博士研究生朴海兰导师李大金教授中文摘要妊娠是一个复杂的生理过程。从免疫学角度，妊娠是一种同种异体移植现象，流产是移植排斥的结果，在正常妊娠过程中，母体对携带父系抗原的胚胎不仅不排斥，而且通过精细的母一胎对话建立独特的母一胎界面免疫耐受微环境，允许胎儿在子宫内生长知道分娩。因此对于母一胎界面免疫耐受的研究对于人类自然流产等妊娠疾患的防治具有重要意义。母一胎界面主要包括滋养细胞、蜕膜基质细胞、蜕膜腺上皮细胞以及免疫细胞。其中70％以上的蜕膜免疫细胞为CD56h

2、劬g。CDl6-NK细胞。本研究通过解析母一胎界面功能细胞对外周和蜕膜NK细胞功能性发育过程，以及CXCLl2／CXCR4信号在其中的调节作用，以探讨母．胎界面NK细胞功能调控的机制。第一部分人外周NK与蜕膜腿的功能表型目的评价外周NK与蜕膜NK的表型及功能差异方法收集正常非孕育龄期妇女外周血，正常早孕妇女蜕膜组织，采用流式细胞术分析外周及蜕膜免疫细胞中NK细胞的表型、细胞因子的表达以及细胞毒活性。结果相对于蜕膜NK细胞，外周NK细胞高表达激活性受体CDl6，NKp44，低表达抑制性受体KIR2DLl；高表达Thl型细胞因子TNF—a，低表达Th2型细胞因子IL一

3、4、IL一10；穿孔素表达和细胞毒活性高于蜕膜NK细胞。结论外周NK细胞呈现激活表型，而蜕膜NK细胞呈现抑制表型。万方数据朴海兰博士学位论文中文摘要第二部分人早孕滋养细胞和蜕膜基质细胞调节外周及蜕膜腿细胞表型及功能目的解析人早孕母．胎界面功能细胞对外周及蜕膜NK细胞表型及功能的调节作用方法滋养细胞、蜕膜基质细胞或滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系与外周NK细胞、蜕膜NK细胞共培养，流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达，细胞毒性检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。结果早孕滋养细胞和蜕膜基质细胞对外周NK细胞的趋化因子受体CXCR4和CCR2表达没有明显影响，而

4、二者均显著降低蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CCR2的表达(P<0．05)；尽管滋养细胞对蜕膜NK细胞CXCR4的表达没有影响，蜕膜基质细胞单独即可上调蜕膜CXCR4+NK细胞百分率(P<0．05)。母．胎界面滋养细胞显著下调外周NK细胞CDl6分子的表达(P<0．05)。滋养细胞、蜕膜基质细胞单独或联合均可下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达。滋养细胞显著下调外周与蜕膜局部NK细胞Thl型细胞因子TNF一Ⅱ的表达；滋养细胞与蜕膜基质细胞单独或共培养均不能改变外周或蜕膜局部NK细胞的IFN—Y的表达水平。滋养细胞显著上调外周及蜕膜局部NK细胞Th2型细胞因子I

5、L．4和IL．10的表达；而蜕膜基质细胞可促进蜕膜NK细胞的IL．4与IL．10的表达水平，但对外周NK细胞Th2型细胞因子的表达没有明显影响。滋养细胞能够降调节外周及蜕膜局部NK细胞穿孔素perforin表达与其细胞毒活性；蜕膜基质细胞可降低外周NK细胞的细胞毒活性，但对perforin的表达没有影响。蜕膜基质细胞也不影响滋养细胞对NK细胞的调节作用。结论母一胎界面功能细胞能够诱导外周及蜕膜NK细胞的耐受表型及Th2型优势，下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性，从而有利于形成母．胎界面免疫耐受微环境。第三部分CXcLl2／CxCR4信号参与滋养细胞和蜕膜基质细胞调

6、节万方数据朴海兰博士学位论文巾文摘要外周及蜕膜Nl【细胞的功能目的解析cxCLl2／CxCIH调节母．胎界面功能细胞对外周及蜕膜NK细胞功能的调节机制方法ELISA方法检测人早孕滋养细胞及蜕膜基质细胞分泌CXCLl2。检测人重组CXCLl2，以及人早孕滋养细胞及蜕膜基质细胞上清液对外周NK细胞的调节作用。CXCR4拮抗剂预处理外周NK及蜕膜NK细胞，再与母一胎界面功能细胞共培养，流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达，细胞毒性检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。结果母．胎界面CXCLl2主要由人早孕滋养细胞分泌，CXCLl2以剂量依赖性抑制外周NK细胞的穿孔

7、素表达与杀伤活性，这种作用可被CXCR4拮抗剂所逆转。阻断了CXCLl2／CXCR4信号通路，能够抑制人早孕母-月台界面滋养细胞与蜕膜基质细胞对外周及蜕膜NK细胞的表面受体、细胞内细胞因子以及杀伤活性的调节作用。结论早孕母．胎界面功能细胞对外周NK及蜕膜NK的调节作用主要由SDF．1／CXCR4信号通路介导。第四部分M／ht，K信号通路参与滋养细胞和蜕膜基质细胞对外周NK细胞功能的调节作用目的解析母-且台界面功能细胞调节外周NK细胞功能的下游信号通路方法将分离的pNK分别用JUNKl／2／MAPK信号通路阻断剂SP600125，P38／MAPK信号通路阻断剂SB2

8、02190