黄芪多糖作为佐剂对乙型肝炎疫苗免疫反应影响的研究

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1、SichuanAgriculturalUniversityDissertationforMasterDegreeInfluenceofAstragaluspolysaccharidesasadjuvantontllelmnluneresPonsetohepatitisBVaCClneinIllice-l■·-·-·‘1n●MasterCandidate：XiaobingChenSupervisor：Prof．XianyinZengSpecialty：BiophysicsYa’an，Sichuan，ChinaJun，2010论文独

2、创性声明lIIIIIIIIIIIIII1[IIY180071本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研肃生躲7虿山易／沙P’％仰{口年易月叫日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：导师签名：雄山乞留玺椤伽i◇年厂月卅日D№年钐月)1日LJ四川农业大学2007级硕士学位论文摘要乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)引起的一种影响人类健康的世界性传染病。接种乙肝疫苗是目前控制乙型肝炎感染的最有效的措施，但是传统的乙型肝炎亚单位疫苗是由乙型肝炎病毒的表面抗原和铝佐剂组成，铝佐剂疫苗仅能

4、引起很好的体液免疫反应而不能引起有效的细胞免疫反应。佐剂可以增强细胞免疫和体液免疫，活化T细胞，上调细胞因子的表达，增强免疫记忆，并能改变免疫反应类型。因此改良佐剂可能增强传统乙型肝炎亚单位疫苗的免疫反应。黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)是中药黄芪的提取物，具有广泛的药理作用，也具有很强的免疫调节作用。APS可从多个方面发挥免疫调节作用：直接影响免疫细胞内的物质代谢，诱导产生相关的免疫调节因子；不仅能够增强机体的特异性免疫反应，还可以增强非特异性免疫反应；既前增强正常机体的免疫功能，又可调节

5、异常机体的免疫功能。本研究将APS作为乙型肝炎亚单位疫苗的佐剂与疫苗一起免疫昆明白小鼠，研究其对乙肝疫苗免疫反应的影响，尤其是对细胞免疫反应的影响。实验选取健康雌性6～8周龄昆明白小鼠35只，体重20---，24g，随机分为5组，每组7只，分别为rHBsAg组、rHBsAg+APS组、rHBsAg+aulm组、APS组和对照组(不进行免疫)。初次免疫设为0天，第14天加强免疫一次，在第21天进行免疫学指标的检测。主要结果如下：实验使用定量ELISA法检测IgG水平，用MTT法检测T细胞增殖反应，用流式细胞仪检测体内CTL反应，结

6、果发现APS显著增强乙肝疫苗诱导产生较高的IgG抗体水平，较强的T淋巴细胞增殖反应和体内CTL杀伤反应，表明APS能够增强乙肝疫苗的免疫反应。为进一步研究APS作为乙型肝炎亚单位疫苗的佐剂对免疫反应的影响，对有关免疫学指标作了进一步检测。用RT-PCR法检测PFP、GraB、FasL和Fas的表达以及用流式细胞仪检测体内细胞因子的表达水平，结果表明APS能够增强乙肝疫苗上调PFP、GraB、FasL、Fas和CD8+T细胞IFN．Y的表达水平，与体内CTL反应结果一致；APS能够增强乙肝疫苗诱导较高的CD4+T细胞IFN．Y、I

7、L．2和IL．4的表达水平，表明APS作为乙肝疫苗的佐剂能够促进机体Thl型和Th2型免疫反应。为进一步探讨APS作为佐剂增强免疫反应的作用机理，用半定量PT-PCR法对l四川农业大学2007级硕士学位论文TLR2、TLR4、TGF．B1和Foxp3的表达水平进行检测，结果表明APS能够很好地增强乙肝疫苗诱导TLR2和TLR4表达，通过上调TLR2和TLR4的表达激发协同刺激分子和相关细胞因子的表达参与适应性免疫应答；APS作为乙肝疫苗的佐剂能够明显降低机体TGF．gl和Foxp3表达水平，通过抑制TGF．gl和Foxp3的表达

8、促进机体免疫反应。以上结果表明，APS作为乙型肝炎亚单位疫苗的佐剂能增强乙肝疫苗的免疫反应。本研究初步证实了APS是一种良好的免疫佐剂，能够显著地提高乙型肝炎亚单位疫苗的体液免疫水平和细胞免疫水平，为乙型肝炎疫苗的研发提供了有意义的基础研究数据资料。关键词：黄芪