兔胚胎玻璃化冷冻保存和遗传检测的研究

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1、第一部分文献综述综述一兔超数排卵和胚胎发育的综述超数排卵(Superovulation)也简称“超排”，是指在母畜发情周期的适当时间注射性激素促进卵泡发育并排卵的繁殖措施，目的在于获得更多的成熟卵子或胚胎(畜牧学，1989)。哺孚L动物的排卵是受“垂体．肾上腺一卵巢’’系统和环境综合作用的结果。诱导超数排卵的机理大致有两部分：促进卵巢卵泡发育和卵母细胞成熟、促进成熟卵泡破裂并排卵(王元兴，1993)。激素诱导超数排卵是最常用的人工干预动物排卵的生产措施，具有重要的生产意义。1．兔的繁殖学常识一般认为兔为全年多次发情动物，夏天发情不明显。发情周期14～16天，情期持续2～3天

2、。一次排卵8～16枚(李善刚，2006)。兔为刺激性排卵的动物，排卵时间约为交配后lO．5h，排除卵子的有效受精时问为6～8h。一般进行诱导排卵的激素组合较多，200IU的PMSG(Pregnantmale'sscrumgonadotropin．孕马血清促性腺激素)联合1001UHCG(Humanchorionicgonadotropin，绒毛膜促性腺激素)，或者50IUHMG(Humanmenopausalgonadotropin，人绝经期促性腺激素)，2．5mgLH(Luteinizinghormone，促黄体生成激素)或者200烬的LH—RH(Luteinizingh

3、ormonereleasinghormone，促黄体生成激素释放激素)都有效。在诱导排卵12～14小时后，大致有92％的个体获得接近正常排卵数的卵子(菅原七郎，1986)。无论配种还是假孕，公兔的交配刺激都是必要的(陈大元，2000)。兔的胚胎发育七天左后就到达孵化囊胚，体外胚胎培养一般不超过七天。兔妊娠周期29～30天。以下是兔卵泡发育过程和胚胎在生殖道的运行过程，图1、图2。图1免卵子发生Fig1Rabbit．occytesgenesi3圈2免胚胎在体内的运行Fig2RabbitembryodavelopraerrtinViVO沈阳农业大学硕士学位论文兔胚胎受精卵分裂、

4、胚泡形成、进入子宫、着床和分娩时间，见表1(陈大元，2000)。袅1免胚胎的体内发育Table1DoveIoOmentofrabbit咖lbl"yosinvivo卵泡发育是一个复杂的过程，能影响卵泡发育的因素都能影响到卵子的发育。不同发育阶段的动物对超数排卵的反应相同，动物年龄有着重要影响。在未成熟组中，超排反应最高期为：小鼠为23～26日龄，金黄仓鼠30--36日龄，大鼠26--29日龄，家兔14～15周龄。同种动物不同年龄间存也在较大差别。朱七恩(2001)等对日本白兔的研究认为青年组胚胎回收数率高，经产母兔的卵子质量优于青年组(P

5、于青年母兔。丁志丽(2004)等研究者认为平均排卵数、胚胎回收率和有效供体的单供体平均正常胚胎绝对数值，经产母兔较高(P

6、PMSG对兔超数排卵效果不充分。(陈大元，2000)。环境温度和季节，总的来说受环境影响极小。当环境温度低于5℃时，种兔性欲减退，母兔发情症状不明显，受胎率和活仔率都下降。目粮营养水平过低、养分不平衡时，第一部分文献综述母兔性欲减退；能值过高时母兔体肥、受胎率低。2．兔的超数排卵激素用于兔超数排卵的激素较多，主要有：ECG、PMSG、HMG、FSH、HCG、GnRH(Gonadotropinreleasinghormone，促性腺激素释放激素)等。一般认为家兔和实验兔是常年发情、夏季乏情的动物。母兔卵巢中始终有成熟卵泡存在。王念功等(1984)认为家兔的发情周期为15天，外

7、阴观察法确定新西兰兔的发情为14～16天。在发情期前l～2天开始诱导超数排卵效果较好(陈大元，2000)。最常使用的有PMSG和FsH。表2是不同激素组合及其效果。表2免不同超数排卵激素用量及其效果TabIe2HormonesandtheresuItsofrabbitsuperovuIat；on沈阳农业大学硕士学位论文3．卵子和胚胎的采集方法3．1采卵动物的准备除采卵的技术外，前期动物准备也很重要。相对于自然排卵，激素诱导超数排卵最常使用。由于兔是刺激排卵的动物，要得到未受精卵或者胚胎，必须有雄兔交配刺激以促进排卵