传染性法氏囊病病毒沧州株的分离鉴定与vp2基因的克隆及序列分析

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1、河北农业大学硕士学位论文传染性法氏囊病病毒沧州株的分离鉴定与VP2基因的克隆及序列分析姓名：刘慧申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：孙继国20120522摘要IIIIllllllllllIllIJIIIIIIIIIIIIIIIIJY2143779传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病对世界养禽业危害极大，本病以损伤鸡的中枢免疫器官法氏囊中的淋巴细胞为特征，主要侵害对象为3-6周龄雏鸡和青

2、年鸡，临诊表现主要为精神不振、厌食、间歇性腹泻、震颤以及高度虚弱；病理剖检主要以脱水，骨骼肌出血，肾小管尿酸盐沉积、法氏囊肿大、出血、呈紫葡萄状为特征。接种疫苗是预防该病最有效的途径。本研究通过对河北省沧州地区几个肉鸡养殖场送检的疑似鸡传染性法氏囊病病料进行检测，并结合琼脂扩散实验，免疫胶体金试纸检测和实验室分子生物学试验，获得了3株鸡传染性法氏囊病病毒，分别暂时命名为CZ．1，CZ．2和CZ．3。通过对3株地方流行株的致病性测定、动物回归实验以及免疫指数的测定，表明CZ．1毒株的毒力较强于其他2个分离株。VP2蛋白是IBDV的主要结构蛋白，同时也是病毒

3、的重要的毒力蛋白和主要宿主保护性抗原。IBDV毒力的变异主要集中在VP2的高变区，它是病毒的主要变异区。VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原，是IBDV毒力变异的关键。本实验通过VP2高变区的引物设计方案设计引物，用RT-PCR方法，从样品中成功扩增出鸡传染性法氏囊病毒(CZ．1株)基因的VP2高变异区，将其回收并克隆到PMD一19．T载体上，通过酶切进行验证，将阳性的质粒送到上海生工生物技术有限公司进行序列测定，将测定结果在Genbank中进行比较，确定所得到的序列即为鸡传染性法氏囊病毒VP2高变异区基因，利用DNAstar，Clustal和Megalin

4、e等相关基因分析软件，对所得到的基因序列进行同源性及序列分析，并通过进化树的绘制和蛋白氨基酸的同源性比较，来了解地方流行毒株的变异情况。将VP2基因序列分析表明，所得到的流行毒株与其他近期所报道的我国流行强毒株的同源性均在90％以上。发现沧州地区近期流行鸡传染性法氏囊病毒VP2基因与山东地区强毒株核酸同源性较近，同源性在97．9％。推测可能是地理位置上相近的原因。关键词：传染性法氏囊病；分离鉴定；VP2基因；克隆及序列分析IsolationandidentficationofInfectionsbursaldiseaseVirusCangzhoustra

5、inandCloningandSequenceanalysisofVP2GeneCandidate：LiuHtliSpecialty：．PreventiveVeterinaryMedicineAdvisor．Ji·guoSunAbstractInfectiousBursalDisease(ⅢD)iSahigrayc．0ntagiousdiseasecausedbyinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)inchickensandturkeys．AndIBDisofgreatharmonpoultryindustryworldl

6、y．Asweknow,vaccinationisthemosteffectivewaytopreventthedisease．，nlcdiseasetodamagethecentralinltlluneorgansofchickenbursalymphocytecharacteristics，mainlyagainsttheobjectfor3-6weeksoldchicksandyoungchickens，clinicalmanifestationsaremainlylassitude,anorexia,diarrhea,intermittenttre

7、morandhighlydebilitating；pathologicalanatomytodehydration，skeletalmusclebleeding,renaluratedeposition，methodthecyst，hemorrhage,apurplegrapeshapefeature．VaccinationisthemosteffectiveWaytopreventthedisease．ThroughthestudyontheHebeiprovinceCangzhouareaseveralbroilerfarmsweresuspecte

8、dofchickeninfecfiousbursaldiseaseweredet