早期应用丹参川芎嗪注射液对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响

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1、lJIfli医科人学硕士学位论文刖吾脑卒中是一种神经内科的常见疾病，根据其发病原因的不同，又可分为缺血性与出血性脑血管病，是发病率、死亡率、致残率和复发率很高的神经系统疾病。其中缺血性脑血管病又远高于出血性。目前公认的缺血性卒中在急性期的有效治疗方法是时间窗内的溶栓治疗，以尽早恢复缺血区血流，然而，在血流的恢复的同时又会对J下常或缺血脑组织产生破坏作用。脑缺血一再灌注损伤的过程是一个复杂的瀑布样电化学级联反应，它涉及多条通路和多个环节。如兴奋性氨基酸释放增加、细胞内钙超载、炎性细胞因子释放、凋亡基因激活等Ⅲ，炎症反应是其中重要的一点。以往对脑缺血．再灌注后脑组织细胞炎症

2、损伤的研究，都存在很大的局限性。在这种炎症损伤的过程中，血脑屏障(bloodbrainbarrier'BBB)作为其中一个很重要的病理环节，它的结构和功能的改变是脑缺血．再灌注损伤的病理生理变化基础。血．脑屏障由三种结构组成：毛细血管内皮细胞、细胞间紧密连接、基底膜以及星型胶质细胞。它可以阻止血液中的某些物质向中枢转运，从而保证中枢神经系统内环境的稳定。脑缺血．再灌注损伤后，脑缺血再灌注后过多生成的自由基(舶e砌ical，FR)与BBB的通透性改变密切相关l粥J，血管内皮细胞(vauscularendothelialcellVEC)是BBB的最重要的一层结构，在正常情况

3、下它通过释放前列腺素12(prostaglandin12，PGl2)等活性物质来提高自身抗损伤能力，而在脑缺血．再灌注损伤后，VEC则会成为氧自由基(oxygenf硪radical，OFR)的主要攻击对象，因为VEC中富含黄嘌呤氧化酶，在缺血．再灌注时能产生OFR，是体内OFR的主要来源。由于BBB开放，通透性改变，血液中的某些有害物质就会进入脑内，从而加重脑的损伤，因此对干预BBB的通透性的治疗具有重要的临床意义。尽管目前已经进行了广泛的神经保护治疗研究，但临床前试验中显示出很有希望的药物在临床试验中的结果却都令人失望P们。中医药治疗缺血性卒中源远流长，有必要对中药的

4、神经保护作用进行研发，寻求中西医结合治疗的新模式或切入点。丹参川芎嗪注射液是在丹参注射液与盐酸川芎嗪注射液的基础上研制出的中西药复方制剂，其组分为丹参素和盐酸川芎嗪。丹参川芎嗪注射液已被广泛的用于心、脑，肾各个器官的保护性治疗【6{J。目前，国内外未见关于SLI对BBB通透性影响的报道。本试验通过观察丹参川芎嗪注射液对脑缺血．再灌注后BBB通透性的影响，探讨其对脑缺血．再灌注损伤的保护作用，对临床应用具有指导意义。山两医科大学硕上学位论文1材料禾口方法1．1实验动物及主要试剂仪器1．1．1动物及分组健康成年雄性SD大鼠48只，由山西医科大学实验动物中心提供，体重在250

5、9一3009。实验动物先随机分为两个组；正常对照组和缺血一再灌注组，其中对照组不作造模处理，只做相应的解剖、分离、挂线和缝合。然后再把缺血．再灌注组分为5个亚组：分别于缺血2h进行再灌注，再灌注时间为3h、12h、24h、48h及72h，每组6只。于规定时间点断头取脑检测脑组织中的EB含量；之后在伊文思蓝漏出最多的时间点，设丹参川芎嗪注射液组和盐水组，于脑缺血半小时前分别给与注射相同剂量的生理盐水及丹参川芎嗪注射液(10m慷g)，比较丹参川芎嗪注射液组和盐水组伊文思蓝的含量。动物模型采用线栓法制作右侧MCAO模型，如实验动物死亡或不符合制作成功标准，则随时补充每组所需只

6、数。1．1．2主要实验试剂生理盐水石家庄四药有限公司丹参川芎嗪注射液贵州拜特制药有限公司伊文思蓝美国si舯a公司甲酰胺上海南翔试剂有限公司氯化三苯四唑氮(2，3，5一Triphenyltetrazoliumchloride，TTC)美国sigma公司1．1．3主要实验仪器电子分析天平TG328A(上海微光仪器厂)台式离心机TDL．60B(北京医用离心机厂)72l型分光光度仪(上海仪器总厂)数显式电热恒温箱(上海跃进仪器厂)电热水浴箱，海尔冷藏冷冻冰箱，格兰仕微波炉1．2实验方法1．2．1大鼠局灶行脑缺血再灌注模型的制备1)渔线栓子的制备：先取一固体蜡块，其熔点为56℃。

7、将其在烧杯内加热溶化。溶化后，将直径为0．215咖，长为5cm的渔线的～端垂直浸入溶化液态石蜡中，浸入的深度为5ll珊，然后将其提起，可见有薄层的石蜡膜黏附在渔线表面，这时渔线的总直径在0．25-0．30mm之问。最后在距线栓头16Im，18IIuIl，20mm处分别做三个标记，以各后用。2)大鼠在造模前先禁食24h，然后称重，按照350m∥1009的剂量，用10％水合氯醛给与腹腔注射麻醉后，仰卧固定。术野皮肤消毒，在大鼠颈部正中切开皮肤，约2—3cm，然后分别钝性分离出右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)及颈内动脉(ICA)，分离