亲子鉴定dna提取标准操作规程

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1、广西区妇幼保健院司法鉴定所标DNA提取标准操作规程文件编号：FYSJ1-SOP-04-2013标题：DNA提取标准操作规程版号：第1版文件类型：受控页码：第5页共5页DNA提取标准操作规程1.目的：规范不同检材的DNA提取操作程序，确保DNA质量，保证STR分型结果准确性。2.原理：Chelex-100是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA分

2、离。磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。3.操作者：具有法医物证检验资格的广西区妇幼司法鉴定所技术人员。4.标本：5％EDTA抗凝全血、8-10ml胎儿羊水、5％EDTA抗凝脐血、FTA纸血斑、口腔拭子、5-10根带毛囊的毛发、绒毛细胞。5试剂：5.1试剂的厂家及规格：5.1.1DNA抽提试剂Chelex-100伯乐公司（Bio-RadLabo

3、ratories,Inc.CAU.S.A）。5.1.2DNA抽提试剂PromegaPP18或PP21DNASystem抽提试剂盒。5.1.3DNA抽提试剂口腔棉签制备基因组DNA试剂盒（G&T，U.S.A）5.1.4无水乙醇分析纯5.1.5异丙醇分析纯5.1.6无菌的超纯水由实验室技术人员制备。5.2试剂的配制：5.2.15％Chelex-100的配制：称取5克粉状Chelex-100于试剂瓶中，加入灭过菌的超纯水至100ml。5.2.2灭菌超纯水的制备：用干净的试剂瓶装超纯水1升左右，经121℃灭菌30分。6仪器及设备：6.1生物安全柜。6.2高速离心机。广西

4、区妇幼保健院司法鉴定所标DNA提取标准操作规程文件编号：FYSJ1-SOP-04-2013标题：DNA提取标准操作规程版号：第1版文件类型：受控页码：第5页共5页6.3超速冷冻离心机。6.4移液器，单道微量移液器（0.5-10ul单道）、单道微量移液器（10-100ul单道）、单道微量移液器（100-1000ul单道）、八道移液器（0.5-10ul八道）和八道移液器（10-100ul八道）。6.5涡旋混匀器。6.6半导体温控混匀器。6.7超纯水制造系统。7操作程序：7.1全血或脐血的DNA抽提（Chelex-100法）7.1.1填写“PCR-STR基因扩增实验记

5、录表”。7.1.2按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序标记1.5mlEP管，加无菌超纯水980ul。7.1.3核对血样，用移液器混匀，吸取1.5ul标本于EP管中（-80℃存放超过一个月的血样取2-3.5ul）。7.1.4颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.1.5加无菌超纯水980ul，颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.1.6取混匀的5%Chelex-100溶液200ul于EP管中（吸取时注意先摇匀5%Chelex-100），盖紧EP管，振荡约15～20sec后，56℃孵浴0.

6、5～2h。7.1.7孵浴结束后振荡约15～20sec，99℃孵浴8min。7.2羊水或绒毛A抽提（Chelex-100法）7.2.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7.2.2按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序标记1.5mlEP管，加无菌超纯水700ml。7.2.3核对标本，用移液器混匀，吸取300ml于EP管中。7.2.4颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.2.5加无菌超纯水1000ul，颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.2.6取混匀的5%Chelex-100溶液2

7、00ul于EP管中（吸取时注意先摇匀5%Chelex-100），盖紧EP管，振荡约15～20sec后，56℃孵浴0.5～2h。7.2.7孵浴结束后振荡约15～20sec，99℃孵浴8min。7.2.8孵浴结束后趁热振荡约15～20sec，12600rpm离心3.5min，上清即为DNA溶液。广西区妇幼保健院司法鉴定所标DNA提取标准操作规程文件编号：FYSJ1-SOP-04-2013标题：DNA提取标准操作规程版号：第1版文件类型：受控页码：第5页共5页7.3毛发的DNA抽提（Chelex-100法）7.3.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7.3.2

8、按照PCR-STR基因扩