瘦素(leptin)基因在山羊不同组织中表达及在乳腺发育不同时期甲基化分析

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1、独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：面够时间：)-o，2-关于论文使用授权的说明月，。日本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒

2、体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：j澎时间：y—y年6月?。日抑繇耻-i一帆w蚓即日青岛农业大学硕士学位论文摘要瘦素(Leptin)基因在山羊不同组织中的表达及在乳腺发育不同时期的甲基化分析摘要为了研究Leptin基因的表达对山羊乳腺发育的影响，v'),级t．Leptin基因的甲基化与基因表达的关系，本实验采用定量PCR方法对不同时期文登奶山羊、崂山奶山羊、波尔山羊乳腺组织qLeptin基因的表达进行检测，并利用亚硫酸盐测序法，分析了相应时期Leptin基N的甲基化水平，目的是要发现青春期中期、妊娠中期、泌乳期和退化期，文登奶山羊、崂山奶山羊和波尔山羊乳腺组织畔'Lep

3、tin基因的表达以及甲基化的变化规律，揭示Leptin基因在三个不同品种山羊不同发育时期乳腺组织中的甲基化与基因表达的关系。因为瘦素在动物体的几乎各个器官都表达，分析测定三印砌的分布和含量等信息对了解Leptin的作用至关重要，可以为深入研究三印砌的生物学作用及其机制提供参考。根据山羊乳腺发育特点，我们分别以青春期中期、妊娠期中期、泌乳中期和退化期四个时期为采样时间点。分别以4个时期文登奶山羊、崂山奶山羊、波尔山羊乳腺组织的eDNA为模板，以∥-actin为内参基因，每一组织设3个重复，进行定量PCR扩增，检测Leptin基因的表达情况。Leptin基因的定量结果显示，三个品种的山羊在青

4、春期中期和退化期Leptin的表达量比较高，妊娠中期和泌乳期表达量差不多都明显低于青春期中期和退化期，并且相同品种山羊在乳腺发育的青春期和退化期与妊娠期和泌乳期比较差异情况均显著(p崂山奶山羊>波尔山羊．且除了在泌乳期文登奶山羊与崂山奶山羊差异不显著(p=0．0675>0．05)以外别的时期差异均显著(p<0．05)。为了分析检测Leptin基因的甲基化情况，分别取文登奶山羊、崂山奶山羊和波尔山羊4个时期的乳腺组织为试验点，采用亚硫酸盐对样本DNA进行

5、处理，测序分析Leptin基因的甲基化水平。文登奶山羊在青春期中期、妊娠中期、泌乳中期、退化期甲基化的CpG位点的数目分别为55、58、58、60；甲基化比率分别78．57％，82．86％，82．86％，85．71％；崂山奶山羊在各个时期甲基化的CpG位点数目分别为59、61、58、60；甲基化比率分别为84．29％，87．14％，82．86％，85．71％。波尔山羊在各个时期的甲基化CpG位点数目分别为：61、60、61、59，甲基化比率为：87．14％，85．71％，87．14％，84．29％。统计后发现，三种山羊在乳腺发育的不同四个时期5’UTRCG位点差不多均被甲基化，而且比率在

6、78％．88％之间。三种山羊无论是在同一时期不同品种之间还是同一品种不同发育时期均青岛农业大学硕士学位论文摘要无规律性可循。同一品种不同时期间的Leptin基因的甲基化水平不存在差异(p>O．05)；在同一时期不同品种山羊间同样也不存在差异(p>O．05)。综合瘦素在乳腺中的定量表达情况，我们可以认为这三个品种山羊的Leptin基因的甲基化与其表达均无直接关系。利用Real．timePC贼术，对瘦素在崂山奶山羊16种不同器官组织的含量进行了检测，分析了其定量表达的情况。结果表明，瘦素在16种器官组织均有表达，表达量最高的是肝脏，最低的是肾脏，表达量从高到低依次为：肝>心>小肠>腿肌>脾>

7、皮肤>乳腺>肺>大肠>血液>腹脂>脑>腹肌

8、>睾丸>卵巢>肾，表明瘦素的表达范围分布广泛不具有组织特异性。关键词：山羊；乳腺；瘦素；5'UTR；甲基化；表达；不同组织青岛农业大学硕士学位论文ABSTRACTExpressionofLeptinGeneinDifferentTissuesofGoatandItsMethylationAnalysisofMammaryGlandinDifferentPeriodABSTRACTInord