不同来源5-氨基乙酰丙酸合成酶的表达、酶学性质研究及其应用

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1、⑧论文作者签名：猛谴』堑指导教师签名：论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：Author’Ssignature：Supervisor’Ssignature：Thesisreviewer1：Thesisreviewer2：Thesisreviewer3：Thesisreviewer4．Thesisreviewer5：Chair：(Committeeoforaldefence)Committeeman1：Committeeman2：Committeeman3：Committeeman4．Committeem

2、an5：Dateoforaldefence：浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝堑太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：；㈣签字日期：沙／甲年石月／0日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝堑太堂可以将学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：和俭1和签字日期：历f坤年6月fo日导师签名：l夕枢印I-签字日期：伽Ⅳ年‘月／p日浙江大学硕士学位论文致谢本课题的研究工作是在林建平教授的细心指导和严格要求下完成的。在此衷心感谢导师对我的谆谆教诲，以及对我在学术、生活和工作等各方面的无私帮助。三年的研究生生涯虽然短暂，但林老师渊博的学识、严谨的治学态度、认真的工作作风和对事业的执着追求都将使我终生难忘，并时时刻刻鞭策我奋发向上。无论是在学习、生活，还是在研究工作的

4、思路、方法以及科研条件的创造方面，林老师都给予了我细心的指导，师从林老师是我此生莫大的荣幸。另外，感谢吴绵斌副教授在论文投稿期间给予我的关心和帮助。学生在此谨向两位老师表示由衷的感谢和深深的敬意。感谢江苏益安科技有限公司的朱力工程师，感谢他在我实验遇到困难和失败的时候对我的鼓励和帮助，与他三年的合作让我受益良多。感谢三年以来与我互勉共励的课题组全体成员，感谢本实验室的博士生闻志强、袁建锋，硕士生杨俊、林逸君、陈冠宇、陈永露、张尧，以及薛海龙、章雅琴，和其他实验室的博士生唐云平，硕士生,文UJII、王海蛟、齐晨等人对我的热情帮助，感谢他们教会了我很多实验操作技术，让我的研究工

5、作得以顺利完成。还有许多帮助过我的同学，朋友没有一一列出，在此一并表示感谢。本工作是国家自然科学基金项目(No．20306026)和国家“973”项目(No．2007CB707805)的部分内容。三年的硕士求学生涯即将结束，本人能顺利完成学业，与家人、亲戚、朋友的关心和鼓励，倪海军、裘娟萍教授等恩师的教诲与栽培，以及金伟等人的支持和帮助是分不开的，在此谨向他们表示衷心的感谢。最后谨向所有关心和帮助过本人的老师、同学、朋友和亲人再次表示衷心的感谢!漏佳伟二零一四年一月II浙江大学硕士学位论文摘要5．氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinicacid，j址A)是生物合成卟啉

6、、叶绿素、亚铁血红素和维生素B。：等四吡咯化合物的共同前体物质，广泛存在于微生物、植物和动物细胞中。ALA的应用非常广泛，除作为一种环境相容性和选择性很高的新型除草剂和农药外，还作为光动力学药物用于癌症的光动力学诊断和治疗。本工作以外源基因的来源为出发点，利用来源不同的5．氨基乙酰丙酸合成酶之间的性质差异，以期筛选得到一种酶学性质优良并可在大肠杆菌体内高活性表达的酶，为ALA的高效生产奠定良好的基础。本文首先克隆并表达了4个分别来源于荚膜红细菌(R．capsulatus)、大豆根瘤菌(日．japonicum)、嗜酸柏拉红菌(尺．acidophilus)、脱氮副球菌(尸．de

7、nitrificans)的编码5．氨基乙酰丙酸合成酶的hemA基因，并对上述hemA基因在大肠杆菌E．coliRosetta(DE3)qb的表达情况、重组酶的比活力和发酵情况等方面进行了比较。结果表明，含有荚膜红细菌hemA基因的工程菌E．coliRoseua(DE3)／pET28a．RC．hemA表现出更好的合成ALA的潜力。通过亲和层析和凝胶过滤层析，制备得到重组酶RC．ALAS纯品。以放射形土壤杆菌0．radiobacterzju一0121)和类球红细菌僻．sphaeroides)的hemA基因所表达的AR．