厄洛替尼治疗lewis肺癌荷瘤小鼠的时辰药理学作用及相关作用机制研究

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1、摘要目的：通过建立Lewis肺癌细胞皮下移植瘤小鼠动物模型，研究厄洛替尼按昼夜不同时辰点给药的抗肿瘤作用及毒副作用，并从表皮生长因子(EGFR)．蛋白激酶B(PKB／AKT)．细胞周期蛋t兰t(CyclinDl)．周期素依赖性激酶4(CDK-4)Jm_路探讨其可能作用机制。方法：1．实验模型建立与分组：建立Lewis肺癌细胞皮下移植瘤小鼠动物模型，随机将荷瘤小鼠分为模型组、低剂量组(15mg·kg。)、中剂量组(30mg·kg‘1)、高剂量组(60mg·kg。1)，每组随机分为8：00、12：00、16：00、20：00、24：00、04：00六个时辰点组，空白对

2、照组不种瘤。2．给药：厄洛替尼各组分别在对应的六个时辰点口服灌胃给予相对应剂量厄洛替尼0．2ml，模型组和空白对照组给予同样体积的羧甲基纤维素钠溶液和蒸馏水。3．药效学指标检测：观察小鼠生活质量，每天测小鼠体重，每隔3天V,Ud,鼠肿瘤体积，绘制瘤体的生长曲线。第21天取血后断颈处死小鼠，剥离肿瘤，称瘤重，计算抑瘤率；血常规检测白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白等的变化。4．相关基因表达：用实时荧光定量PCR(QuantificationalRealTime．PCR)检测不同时辰点小鼠肿瘤组织中EGFR、AKTl、AKT2、CDK．4和CyclinDlrnRN

3、A的表达水平。5．相关蛋白表达：蛋白质印迹法检测不同时辰点给药后肿瘤组织中蛋白AKT、P-AKT、CyclinDl的表达变化。结果：1．厄洛替尼低中高剂量组的肿瘤生长较模型组均有明显抑制(尸<0．05)，中剂量组和高剂量组较低剂量组肿瘤生长缓慢(P<0．05)，中高剂量组之间无显著性差异。2．不同时辰点比较，厄洛替尼组肿瘤生长明期(8：00、12：00、16：00)较暗期(20：00、24：00、04：00)明显减慢(P<0．05)；16：00组生长最慢(P<0．05)。J

4、JJjI

5、IfJ舢圳ⅧⅧ㈣圳舢ⅢY25886523．与空白对照组比较，模型组白细胞、中性粒

6、细胞和淋巴细胞计数明显升高(P<0．05)，血红蛋白明显降低(尸<0．05)；与模型组比，24：00、04：00组白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞明显升高(尸<0．05)，16：00、20：00组血红蛋白降低明显(尸<0．05)。4．与模型组比较，用药组8：00、12：00、16：00、20：00、04：00各组瘤重明显减轻(尸

7、少量炎细胞浸润。6．与模型组比较，8：00、12：00、16：00组EGFR基因表达相对量降低(尸<0．05)，各组之间表达无显著性差异(P>0．05)，8：00、12：00、16：00、20：00组AKTl基因表达相对量降低(尸<0．05)，16：00组降低幅度最大(P

8、00明显降低(P<0．05)；CyclinD蛋白表达在8：00、12：00、16：00和04：00明显降低(尸<0．05)。结论：厄洛替尼对小鼠非小细胞肺癌皮下移植瘤有明显的抑制作用，且其疗效和毒副作用呈现昼夜节律变化，其作用机制可能与EGFR-AKT-CyclinDl．CDK,．4通路有关。硕士研究生指导教师王培培(药理学)李明春教授关键词：厄洛替尼；昼夜节律；时辰化疗；Lewis肺癌；抗肿瘤Objection：ABSTRACTTostudytheantitumoreffectsandsideeffectsoferlotinibwithdifferentdosi

9、ngtimeinLewistumor-bearingmice，andinvestigateitsunderlyingmechanismviaEGFR-AKT-CyclinD—CDK-4pathway．Methods：1．ThemousemodelofLewislungcancerxenograftswasestablished．Theanimalswererandomlydividedintothreedosegroups(15，30，60mg·kg。1)andonemodelgroup，andeachgroupwasdividedinto6timegroupsi

10、nclud