白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对cyp3a蛋白表达的影响

白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对cyp3a蛋白表达的影响

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时间:2019-03-03

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1、河北医科大学硕士学位论文白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对CYP3A蛋白表达的影响姓名:潘会敏申请学位级别:硕士专业:中药学指导教师:牛丽颖201203中文摘要白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对CYP3A蛋白表达的影响摘要目的:白芍总苷(Totalglucosidesofpaeony,TGP)是自白芍根中提取的有效部位,以芍药苷(Paeonlflorin,Pae)和芍药内酯苷(Albiflorin,Alb)的含量最高。课题组前期比较了TGP在正常和急性CCl4肝损伤大鼠体内的药代动力学参数,发现其在正常和病理状态下的参数明显不同,并对TGP的胃肠吸收、血浆蛋白结合率、组织分布等特点进行

2、了研究。为进一步研究TGP的药代动力学,明确其体内排泄特点,研究TGP对肝药酶CYP3A蛋白表达的影响,本实验以HPLC法为手段,采用固相萃取方法同时测定Pae和Alb在大鼠尿液、粪便和胆汁中的含量,明确TGP的主要排泄途径,同时以正常大鼠和急性CCl4肝损伤大鼠为实验对象,采用WesternBlot法观察TGP对大鼠CYP3A蛋白表达的影响,探讨TGP保肝作用的相关机制。方法:1白芍总苷在大鼠体内的排泄研究1.1色谱条件采用phenomenexC18色谱柱(4.6x250mm,5“m),流动相均为乙腈一0.1%冰乙酸,尿液样品流动相比例为16:84,粪便及胆汁样品比例均为13

3、:87;流速1mL/min;检测波长232rim;柱温25。C;进样量均为l0止。1.2样品预处理1.2.1尿样预处理精密量取尿样O.4mL,加入蒸馏水O.2mL及内标龙胆苦苷溶液20止,涡旋混匀后通过已活化的固相萃取小柱,先用10%的甲醇2mL淋洗杂质,继用甲醇1mL洗脱,洗脱液定容至lmL,离心(12000r/min),取上清液10此进样分析。1.2.2粪便预处理将粪便样品于.40。C保存24h以上,冷冻干燥,称定重量,研碎,取粪便冻干粉0.01g,加入1mL蒸馏水,涡旋混匀5min,离心(12000r/min)10min,取上清液O.2mL,加入蒸馏水O.2mL及内标龙胆

4、苦苷溶液20此,中文摘要涡旋混匀,其余处理同“尿样预处理”。1.2.3胆汁预处理取胆汁样品0.2mL,其余操作同“尿样预处理”。1.3排泄研究1.3.1TGP在大鼠尿液和粪便中的排泄Wistar大鼠5只,置代谢笼中,灌胃给予TGP水溶液(1.41g/kg),分别收集各时间段尿液及粪便,HPLC法测定样品中Pae和Alb浓度,根据随行标准曲线计算各自含量。1.3.2TGP在大鼠胆汁中的排泄大鼠灌胃给予TGP水溶液(1.41g#kg),腹腔注射25%乌拉坦麻醉,分离胆总管并行胆管插管引流术,收集各时间段的胆汁,HPLC法测定样品中Pae和Alb浓度,根据随行标准曲线计算各自含量。2

5、白芍总苷对正常大鼠CYP3A蛋白表达的影响25只大鼠按体重随机分为5组(正常对照组,TGP低、中、高剂量组,阳性对照组)。正常对照组给予纯化水,TGP低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予TGP0.47、1.41、2.82g/kg,连续14天;阳性对照组于第11天腹腔注射地塞米松75mg/kg,连续4天。第15天将各组大鼠断头处死,取肝,差速离心法制备肝微粒体,WestemBlot法检测CYP3A蛋白表达。3白芍总苷对急性CCl4肝损伤大鼠CYP3A蛋白表达的影响30只大鼠按体重随机分为6组(正常对照组,模型组,TGP低、中、高剂量组,阳性对照组)。正常对照组与模型组给予纯化水,TG

6、P低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予TGP0.47、1.41、2.82∥kg,阳性对照组大鼠给予联苯双酯O.2g/kg,连续14天。于末次给药后2h,除正常对照组注射等量生理盐水,其余5组均皮下注射50%CCl4玉米油复制急性CCl4肝损伤模型,16h后将大鼠断头处死,取血分离血清测定ALT、AST;取肝,称总重,计算肝脏系数;肝左叶的相同部位用lO%甲醛溶液固定,常规石腊包埋,HE染色,光镜下观察组织损伤程度;部分肝组织差速离心法制备肝微粒体,WesternBlot法检测CYP3A蛋白表达。结果:1白芍总苷在大鼠体内的排泄研究中文摘要1.1方法学考察大鼠尿液、粪便和胆汁中Pae

7、、Alb及内标峰在本条件下专属性良好,阴性无干扰,日内和日间精密度RSD均在10%以内,准确度均在90%'---"110%之间,两者及内标的提取回收率均在90%以上,样品预处理前后室温放置和冻融循环后仍保持稳定。1.2TGP在大鼠尿液、粪便和胆汁中的排泄大鼠灌胃给予1.41g/kgTGP后,48h尿液和粪便及36h胆汁中芍药苷的累积排泄量分别为(610.0士53.9)、(60630.4+4546.3)、(5640.3+504.3)¨g,占给药量的(0.583+0.042)%、(59.11±6

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