《生物化学与分子生物学实验指导》

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1、《生物化学与分子生物学实验指导》供生物技术专业使用海南医学院理学院生物化学教研室生物技术专业实验室目录第一篇理论部分………………………………………………………………………………………………………..第一章光谱技术第二章电泳技术第三章层析技术第四章离心技术第五章蛋白质分析技术第六章酶的分离与纯化第二篇实验部分………………………………………………………………………………………………………..实验一双缩脲法测定蛋白质含量实验二Folin试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量实验三紫外吸收法测定蛋白质含量实验四凯氏定氮法测定蛋白质含量实验五血红蛋白及其衍生物的吸收光谱分析实验六血清丙氨酸

2、氨基转移酶（ALT）测定（赖氏法）实验七底物浓度对酶活性的影响实验八血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的测定实验九葡萄糖氧化酶（GOD）法测定血糖含量实验十血清尿素氮测定——二乙酰-肟法实验十一血清总甘油三脂测定——酶联测定法测定实验十二乙酰丙酮测定法测定血清总甘油三脂含量实验十三血清总胆固醇测定——酶联测定法测定血清总胆固醇含量实验十四硫磷铁比色法测定血清总胆固醇含量实验十五血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳——微量法实验十六蛋白质的分离提纯与鉴定实验十七微量柱色谱——DE-52分离血清γ-球蛋白实验十八DEAE纤维素离子交换色谱分离血清蛋白质实验十九酶的特异性及温度和pH对酶活性的影响

3、实验二十维生素C的含量的测定（碘滴定法）实验二十一植物超氧化物歧化酶的测定实验二十二SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1第一篇理论部分2第一章光谱技术大量的化学物质具有一定的颜色，许多无色物质也可以与显色剂作用，生成有色物质，这些有色化合物本身随浓度的变化而出现颜色深浅的改变，浓度越大，颜色越深，相反亦然。为此可以通过测定颜色深浅的方法对此有色物质进行定量分析。最早的比色法是纳氏比色法，它是按浓度从低到高，配好一系列标准管，然后将待测样品与标准管逐个进行比较定量，也就是检验中的比色列法，如黄疸指数的比色法，就属于这一类，实际属于目力比色列法。这种方法虽然简单，但是误差很大。后来改用目力

4、比色法进行比色，最先使用的是杜氏目力比色计进行比色定量，原理和结构是比色计下端有一反光镜，利用目视和电灯光源向上反射，其上方有两个底部透明的相同比色杯，分别盛装标准液和待测液，两杯内浸入透明固定玻璃柱，通过螺旋调节比色杯上下，以改变玻璃柱与比色杯中溶液的距离，经过三棱镜使光进入目镜的视野中，再使两半园光强相等时，读取读数，经换算出待测物浓度。此方法由于目力的主观因素在内等多种影响因素很多，误差也很大。为了克服人为主观因素的误差，进一步用光电池代替人的肉眼观察，从而设计出光电比色计，其原理是一束平行单色光通过一定厚度的有色溶液后光线被吸收一部分，未被吸收的光线透过溶液经光电池接受

5、，从而使电光能转换成电能，用检流计测电流大小，从而计算出待测溶液的浓度。光电比色计只适合在有限波长下测量，而且波长的半宽度大。因此，它不能满足不同分析工作的需要。使用多个截止滤光片虽然可以满足需要，但却很昂贵。其次，光电比色计的灵敏度也较低，并且只限于在可见光波段。为了克服以上不足，便发展了性能更好的分析方法即分光光度法。分光光度法可以将分析区域扩展到红外和紫外波段。这样，许多用比色法无法进行分析的无色物质，只要在红外或紫外区域内有适当的吸收峰，便可以用相应的分光光度法加以测定。从而大大扩展了物质的测定范围，尤其是扩大了该法在有机化合物检测方面的应用。分光光度法既可以应用于吸收

6、光谱仪器，也可以用于发射光谱仪器。发射光谱仪器主要有光栅光谱仪、荧光分光光度计和火焰（分光）光度计等。根据物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的一类分析方法称为光谱技术。它具有灵敏、快速、准确、简便和不破坏试样等优点，是一种最常用的生化分析技术。光谱技术包括发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类。在方法上有的侧重物质的定性及结构分析，有的侧重物质定量测定。本章将侧重介绍定量测定方法即可见及紫外分光光度法、荧光法，同时简要介绍原子吸收光谱法、火焰光度法及比浊法等。第一节光谱分析的基本原理3一、光的基本性质光是一种电磁辐射，属于电磁波，是能的一种

7、表现形式，是一种以巨大速度通过空间传播的光量子流，在不同的介质处发生反射、折射、衍射、色散和偏振等现象。光具有波动性，是按波动的形式进行传播，并可用波长、频率、传播速度等参数来描述。光波于两个波峰或波谷之间的距离称为波长（λ），而单位时间内通过某一点的波的数目称为频率（ν），波长与频率之间的关系是：cλ=1-1ν式中，c为光速。光也具有微粒性，是由“光子”或称“光量子”所组成。根据量子理论：分子从光波中吸收能量是以不连续的微小能量单位，称为“光量子”形式进行。每一个光量子的能量与光的频率成正