海洋绿藻脂质分析及分类研究

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1、■●学校代码：研究生学号：10264M070102108上海海洋大学硕士掌位论文题海洋绿藻脂质分析及分类研究．．．AnalysisonLipidandClassificationin英文题目：专业：研究方向：姓名：指导教VS．MarineGreenAlgae水生生物学水域生态学。尹琳琳杨东方杨佰娟二。一。年5月12日l上海海洋大学学位论文原创性声明JfllPIIllrlrrlJIII＼1821753本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论

2、文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：尹琳如k日期：纠口年6月箔日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于．不保密耐学位论文

3、作者签名：尹蛛妹日期：础D年6月陷日±渔海滢太堂博／硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王群华东师范大学教授主席张饮江上海海洋大学副教授委员李娟英上海海洋大学副教授委员邵留上海海洋大学讲师秘书上海海洋大学水产与生命20l0年6月答辩地点，答辩日期学院B435室ll

4、1●上海海洋大学硕士学位论文海洋绿藻脂质分析及分类研究摘要近年来，赤潮和绿潮在全球海岸频繁爆发，影响范围和危害程度越来越大，已逐步成为一种世界性海洋灾害。关于赤潮绿潮藻种来源的鉴定，一直都是其治理和防御的关键问题。传统的藻种鉴定依赖于形态学，由于其对操作者的要求高，鉴定时间

5、长等缺陷限制了它的普及推广。伴随着分析技术的成熟，有人提出，利用藻类中特有的化学成分作为鉴定指标进行藻种的鉴定。藻类的主要化学成分包括糖类、蛋白质、脂质等，其中，脂质中的脂肪酸和甾醇是常见的化学鉴定指标。本文以海洋绿藻为研究对象，利用现代分析仪器，如棒状薄层色谱仪(TLC)、气相色谱仪(GC)、气相色谱质谱联机(GC—MS)等对海洋绿藻中的脂质组成和相对含量进行分析，进一步对脂质中的脂肪酸的组分和含量进行测定，建立分析方法。同时，由于目前藻类常用的化学分类技术如气相、液相等存在操作复杂、时间较长、成本较高的问题，借鉴中药、石油等领域分类学中傅里叶红

6、外光谱技术的简便、无损、快捷的特点，本文提出利用傅里叶红外光谱技术结合化学计量学应用于藻类的分类研究。主要内容和研究成果如下：引言部分描述了海洋绿藻的生物学特征、化学组分和开发利用的研究现状。阐述了化学分类学应用于藻类研究及相关分析技术如红外光谱(IR)、TLC、GC、GC．MS的特点和应用现状。简单介绍了化学计量学在藻类中的应用。并提出了本文的创新点及研究意义。第一章采用超声辅助方法提取海洋绿藻中的脂质，通过设计正交实验，优化影响因素，确定了超声波功率240W、反应时间30min、甲醇和藻粉质量比6：1、KOH百分含量7．5％、反应温度为室温的最

7、佳提取条件。为了更好的了解绿藻脂质的组成，通过优化棒状薄层脂质分析的展开剂、展开次数和点样量，建立了以苯一氯仿．乙酸(体积比50：20；0．7)和正己烷．苯(体积比35：35)为展开剂，点样量为lug的最佳分析方法，新方法的精密度和重现性良好。利用最佳提取条件和分析方法分别测定小球藻和浒苔样品，通过与脂质标准品比对发现，两种绿藻都含有烃类物质、甲酯化脂肪酸、游离脂肪酸、磷脂和复杂脂质，且相对含量较为相似。同时，将棒状薄层的实验结果与经典的气相分析结果比较，两者高度吻合，表明棒状薄层色谱应用于海洋绿藻的脂质分析是可行的。Il上海海洋大学硕士学位论文第

8、二章针对目前海洋绿藻脂肪酸前处理过程混乱的现状，通过单因子实验，对多个影响因素进行优化，建立了以KOH．CH30H溶液为皂化试剂，60℃水浴环境下皂化60min；以HCl．CH30H溶液为甲酯化试剂，60℃水浴甲酯化20min的最佳前处理方法，该方法的精密度在0．38％．3．25％之间，重现性在O．65％一5．8％之间。采用上述最佳前处理方法对海洋绿藻样品进行GC．MS分析，结合NIST5．0谱库和脂肪酸混合标准品，确定了海洋绿藻脂肪酸的分布范围及相对含量，说明此方法可用于海洋绿藻脂肪酸的实际测定。同时，在相同条件下，对标准品进行气相色谱．氢火焰离

9、子检测器(GC．FID)和GC．MS检测，结果表明，两种方法测得的脂肪酸种类完全相同，但GC—MS响应值较高，GC．FID