egcg及氟伐他汀抑制anti--β2gpiβ2gpi复合物诱导的thp--1细胞活化

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1、JIANGSUUNlVERSITY密级：垒五博上学位论文DoCToRALDISSERllATION论文题目：学科专业：作者姓名：指导教师：答辩日期：@EGCG及氟伐他5T$[P$1Janti—B2GPI／B2GPI复合物诱导的THP．1细胞活化I缶床检验诊断学王婷周红教授二0一三年十二月分籽R593UDC616编号1029980714012@江

2、孽大擎博士学位论文论文题目Eggg区氩垡他江地剑垒望童i：乜29￡兰绁29￡兰复金物透昱数!H￡：里细胞活化指导教师圃红麴援论文提交日期2Q里圣生：里兰旦答辩日期2Q曼3生呈2旦学位授予单位和日期一江蒸太堂生旦答辩委员会主席评阅人年月

3、日ClassifiedIndex：R593UCD：616Ph．D．DissertationEGCGANDFLUVASTATININHIBITACTIVALTIoNoFTHP．1CELLSINDUCEDBYANTI一[；2GPI／p2GPICOMPLEXByWangTingMajor：ClinicalLaboratoryDiagnosticsSupervisor：Prof．ZhouHongJiangsuUniversityNov,2013独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究1：作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其

4、他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：弘f)年I。月刁日／学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查

5、询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密∥。学位论文作者签名：蔓敏穹∽弓歹口l’年I≯月∞日／指导教师签名：叫l’年Iy月“日江苏大学博士学位论文摘要研究目的：p2糖蛋81(beta．2．glycoproteinI，p2GPI)与其相应抗体(抗p2GPI，anti一132GPI)形成复合物，能够刺激血液单核细胞、血管内皮细胞活化，表达相关细胞因子，参与抗磷脂综合征(antiphospholipidsyndrome，APS)的高凝状态和炎性反应，

6、是其重要的病理机制之一。课题组前期研究揭示，在anti-p2GPI／p2GPI复合物刺激人单核细胞株THP-1表达组织因子(tissuefactor，TF)的过程中，跨膜蛋白Toll样受体4(Toll—likereceptor4，TLR4)及其下游信号转导分子能够被诱导表达并参与细胞的激活作用，并且部分依赖膜联蛋白II(AnnexinA2，ANX2)，成为APS血栓形成的机制之～。本论文旨在前期研究基础上，以TF和肿瘤坏死因子一0【(tumornecrosisfactor，TNF．仅)为指标，探讨绿茶中重要的活性成分表没食子儿茶素一3一没食子酸酯(epigallocatech

7、in一3一gallate，EGCG)以及他汀类之一的氟伐他汀能否抑$Oanti一132GPI／132GPI复合物介导的单核细胞株T唧一1活化，其具体分子机制如何，为APS预防和治疗提供新的思路。研究方法：(1)利用实时定量PCR(Real—timequantitativePCR，RT-qPCR)检测anti一_

8、32GPI／132GPI复合物诱导THP一1细胞TF和TNF．amRNA的表达，采用试剂盒检测TF活性，ELISA试剂盒检测IEGCG及氟伐他汀抑制anti．132GPI／132GPI复合物诱导的THP．1细胞活化TNF．0【蛋白含量。(2)采用不同浓度的EGCG和氟

9、伐他汀预处理THP．1细胞，MTT法观察对细胞增殖活力的影响。(3)观察不同浓度的EGCG和氟伐他汀对anti一132GPI／132GPI复合物诱导THP．1细胞表达TF和TNF．c【的抑制作用，并检测其量效性和特异性。(4)运用RT-qPCR和Westernblotting方法检测EGCG和氟伐他汀对anti．p2GPI／p2GPI复合物诱导的THP一1细胞TLR4mRNA和蛋白表达的抑制作用。(5)Westernblotting检测anti—f12GPI／f12GPI复合物刺激THP一1细胞有丝分裂