hcv多表位抗原疫苗免疫学评价

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1、中国医学科学院医学生物学研究所硕士研究生毕业论文摘要丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)是一种严重危害人类健康的病毒。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起。目前全球约有1．7亿~2．0亿HCV感染者，此感染者中70*／*"85％可发展成为慢性感染，病程可达20～30年，约有20％可发展成肝硬化，其中又有20％可转化为肝细胞癌。目前对于HCV慢性感染尚无高效的特异性治疗方法，仅局限于采用疗效欠佳的聚乙二醇干扰素Q和利巴韦林等抗病毒途径，但副作用较大，因此研制HCV疫苗对于控制HCV流行具有重要意义。由于HCV基因序列存在高度变异性，导致H

2、CV相似株的存在和免疫逃避现象，使HCV得以逃避宿主免疫机制，造成HCV持续感染，同时不论在体内还是体外，HCV感染后均能产生中和抗体，但这些抗体具有严格的毒株特异性，对变异毒株缺乏有效的交叉中和保护作用，因此研制有效的HCV疫苗必须能够诱导机体产生针对不同HCV株的交叉免疫保护作用。本研究结合NS区相关抗原表位在抗HCV免疫反应中具有重要意义的研究结果，在前期七表位序列基础上增加了三个具有保守意义的NS区抗原表位。根据HCV免疫反应的主要效应机制为细胞免疫，以T细胞表位为主，B细胞表位为辅，分别从HCV六个基因型中选取具有代表意义的保守表位，

3、理论上可以代表HCV的基本抗原结构，同时考虑中国人种基因频率较高的HLA分子限制性HCV抗原表位。根据现有资料，本研究在十个表位之间使用了铰链区作为间隔，以保证各表位有充分的空间旋转可能。该重组抗原表位多肽转化大肠杆菌DH5a后，通过筛选获得高效表达重组蛋白的工程菌。表达产物以包涵体形式存在，包涵体经洗涤溶解复性及一系列纯化步骤后，获得纯度较高的目的蛋白。Westernblot结果显示纯化的重组抗原表位多肽具有良好的抗原反应性。重组抗原表位多肽免疫小鼠和恒河猴后，ELISA实验检测结果显示，该重组抗原表位多肽在小鼠和恒河猴体内获得了较高的抗体免

4、疫水平。本研究成功将重组抗原表位多肽HCVe在大肠杆菌DH5a中高效表达，对蛋白表达、复性纯化等实验条件进行了初步探索；在BALB／e小鼠和恒河猴体内，对该重组抗原表位多肽的免疫学效应做了初步研究，为本课题后续灵长类动物实验提供了很好的实验资料。与此同时，本研究正在构建恒河猴MHC．肽中国医学科学院医学生物学研究所硕士研究生毕业论文摘要四聚体，已经获得构建四聚体的MHC-BSP蛋白和132m蛋白，这为下一步构建四聚体提供了实验基础。一旦四聚体构建成功，将能够精确定量分析实验动物接受重组表位抗原多肽HCVe免疫后，体内CTL活性的变化情况，以此确

5、定该重组表位抗原多肽的最佳免疫效果。关键词：丙型肝炎病毒多表位疫苗多表位抗原原核表达与纯化BALB／c小鼠恒河猴ELISAMHC．肽四聚体2中国医学科学院医学生物学研究所硕上研究生毕业论文摘要AbstractThehepatitisCvirus(HCV)isamajorpublichealthproblem．HepatitisCisaliverdiseasecausedbyHCV．Anestimated170millionindividualsarechronicallyinfected、析mHCVand3-4millionindividual

6、salenewlyinfectedeachyear．Approximately80％ofnewlyinfectedsubjectsprogresstochronicinfection．Cirrhosis，whichdevelopsinapproximately10-20％ofchronicallyinfectedpatients，isassociatedwithahighriskoflivercancer(1—5％ofchronicallyinfectedindividualsoveraperiodof20-30years)．Thecurren

7、tlyrecommendedtherapyofchronicHCVinfectionisthecombinationofapegylatedinterferonalfaandribavirin．Combinationtherapywithpegylatedinterferonandribavirinisthetreatmentofchoice，resultinginsustainedvirologicresponseratesof400／'0-80％．SodevelopmentofaneffectivevaccineagainstHCVisve

8、ryimportantforthecontrolofHCVprevalence．Howeverithaslongbeendefinedasadiffi