佛手中活性成分提取分离及其体外活性测试研究

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1、佛手中活性成分提取分离及其体外活性测试研究重庆大学硕士学位论文（学术学位）学生姓名：李文娟指导教师：徐溢教授专业：药物化学学科门类：理学重庆大学化学化工学院学院二O一三年五月ExtractionandSeparationofEffectiveComponentsfromBergamotandTheirBiologicalActivitiesStudyinvitroAThesisSubmittedtoChongqingUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirem

2、entfortheMaster’sDegreeofScienceByLiWenjuanSupervisedbyProf.XuYiSpecialty:MedicinalChemistryCollegeofChemistryandChemicalEngineeringofChongqingUniversity,Chongqing,ChinaMay,2013中文摘要摘要佛手是芸香科植物香橼的干燥果实，主要含有挥发油、香豆素类、黄酮类、多糖等化学成分，具有抗肿瘤、调节免疫、抗炎、抗氧化等药理作用，作为重庆的一

3、种道地药材具有较高研究价值。当前，对佛手植物的开发利用大多停留在其挥发油成分方面，而对佛手中大量的其他活性成分及其相应的生物活性研究却较少。据此，本文在综述佛手药材相关研究进展的基础上，对佛手的活性化学成分及生物活性进行研究，为深入开发利用佛手资源提供科学依据。本文的主要研究工作及成果包括：1.采用溶剂提取法对佛手进行了系统分离和鉴定。以60%乙醇溶液为溶剂对佛手进行提取后，采用有机溶剂萃取，重点对石油醚、乙酸乙酯萃取层进行系统分离，然后利用柱层析、重结晶、制备薄层色谱等方法进行分离纯化，依照理化性质

4、和与标准核磁图谱的对照，鉴定出了五种单体化合物，即：柠檬油素、滨蒿内酯、伞形花内酯、佛手柑内酯和胡萝卜苷，为后续的抗肿瘤活性成分的筛选及测试提供供试品。2.采用单因素实验与正交优化法对佛手多糖的水提工艺进行优化，确定提取佛手多糖的最佳参数为：提取温度90℃、料液比1:15、提取时间2h、提取次数3次。通过苯酚-硫酸法对佛手粗多糖中的总多糖的含量进行测定，测得佛手中总多糖在粗多糖中含量为61.51%。采用逐级醇沉法对佛手多糖类成分进行初步分离，逐级醇沉得三种粗多糖（FSP-1、FSP-2和FSP-3），

5、得率分别为5.75%、3.57%、4.34%，作为此后的抗氧化活性测试物。此外，采用DEAE纤维素柱层析法对佛手粗多糖FSP-1进行了分离纯化，得到2种纯多糖（BP-1、BP-2），BP-1和BP-2水解后，经TLC分析，发现其单糖成分均为葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖。3.采用体外细胞毒性测试实验，对分离得到的四种香豆素类成分（柠檬油素、滨蒿内酯、伞形花内酯、佛手柑内酯）和佛手粗多糖的体外抗肿瘤作用效果进行了测试。通过96孔板培养-荧光检测分析，测试了上述四种香豆素类成分和佛手多糖的体外抗肿瘤作用，结合倒

6、置显微镜观测了上述分离产物对细胞形态的影响。研究显示，柠檬油素、滨蒿内酯和佛手柑内酯对143B人骨肉瘤细胞的生长有明显的抑制作用，显微镜观测柠檬油素、滨蒿内酯和佛手柑内酯三种活性成分对肿瘤细胞生长情况的影响，也显示出其对肿瘤细胞增殖具有抑制作用。4.基于化学发光分析法建立了适用于佛手多糖体外自由基清除能力测试的抗氧化活性评价方法。该方法根据系统化学发光被抑制的程度，评价佛手多糖对活性氧自由基的体外的清除能力。实验通过优化化学发光体系实验参数，测试得到三种I重庆大学硕士学位论文粗多糖（FSP-1、FSP

7、-2和FSP-3）的体外抗氧化活性数据。结果表明上述三种粗多糖对羟基自由基、超氧根离子自由基和过氧化氢具有一定的清除作用，对羟基自由基的清除能力较强，对过氧化氢的清除能力相对较弱，且FSP-3对三种自由基的清除作用均为最大。结果表明，佛手多糖可作为潜在的具有抗氧化活性的天然药物，具有较高的研究价值。关键词：佛手；香豆素；多糖提取分离；抗肿瘤；抗氧化本论文由国家科技部重大专项“创新药物孵化基地”子课题“中药活性成分分离纯化平台”[2010ZX09401-306-1-5]资助II英文摘要ABSTRACTB

8、ergamotisthedryfruitofcitronofrutaceaeplants,chemicalcomponentsmainlycontainvolatileoil,coumarone,flavonoids,polysaccharidesandsoon,possessversatilebiologicalactivitiesincludinganticancer,anti-tumor,anti-inflammatory,antifungal,a