ev71感染树突状细胞mapk信号通路分子差异表达研究

《ev71感染树突状细胞mapk信号通路分子差异表达研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文论文题目EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究研究生姓名侯学伶指导教师姓名史伟峰专业名称临床检验诊断学研究方向免疫和微生物论文提交日期2013年4月EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究中文摘要EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究中文摘要目的：筛选树突状细胞（DCs）感染肠道病毒71型（EV71）前后丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路分子基因差异表达，阐明MAPK信号通路在EV71感染中的作用及效应机制，为预防和治疗EV71感染提供新的策略。方法：(1)密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，贴壁2小时后去除悬

2、浮细胞，加入含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基、重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、重组人白细胞介素-4(IL-4)的培养液诱导培养6天，流式细胞仪检测其表型，获得未成熟DCs；随后用EV71感染未成熟DCs，并检测感染后DCs表型。（2）采用qRT-PCR方法分别检测EV71感染前和感染2h及8h后DCs中MEK/ERK信号通路相关基因表达情况。（3）WesternBlot检测MEK/ERK信号通路关键蛋白的磷酸化水平及EV71/VP1的表达量。结果：（1）流式细胞技术检测培养第6天DCs表型，CD11c，HLA-DR表达率高达90%以上，

3、CD80、CD86达60%以上，CD83表达率为19.9%，淋巴细胞型CD3低表达，是未成熟DCs的标志。EV71感染后DCsCD11c、HLA-DR依旧高表达，CD83、CD86表达较未感染DCs表达率高。（2）RT-PCR结果显示EV71感染DCs后IκB-α、IKKβ、IL-1α、IL-12、JUN、Fos、NF-ΚB1等基因表达明显上调；而MAP2K1、MAP2K2、MAPK1和MAPK3的mRNA表达量并未见明显变化。（3）WesternBlot实验结果显示，ERK信号通路相关蛋白MEK1/2和核内转录因子c-Jun在EV71感染8h后磷酸化水平增高，ERK1/2

4、在2h、8h和20h后分别呈现出增高、降低再增高的双相激活趋势。NF-κB蛋白磷酸化水平及EV71VP1蛋白表达量随感染时间延长而增加。结论EV71感染DCs后，可明显刺激DCs的成熟并双相激活MEK/ERK信号通路，以上结果说明MEK/ERK信号通路的激活与EV71感染有一定的相关性。活化后的MAPK能够参与细胞的增殖、凋亡、炎症反应等过程，可能为预防和治疗EV71感染提供新的思路。I中文摘要EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究关键词：肠道病毒71型；树突状细胞；丝裂原活化蛋白激酶；细胞因子作者：侯学伶指导教师：史伟峰IIDifferentialgene

5、expressionsofMAPKsignalingpathwaymoleculesinDCsagainstenterovirus71infectionAbstractDifferentialgeneexpressionsofMAPKsignalingpathwaymoleculesinDCsagainstenterovirus71infectionAbstractObjective:TostudydifferentialgeneexpressionsandfunctionofMAPKsignalingpathwaymoleculesinenterovirus71(EV71

6、)-dendriticcells(DCs),andclarifytheeffectandmechanismofMARKsignalingpathwaymoleculesinEV71infectionsoastoprovideanewstrategyforpreventionandtreatmentofEV71infectionMethods:Mononuclearcells(PBMC)werepurifiedfromtheperipheralbloodbyFicoll-Hypaquedensitygradientcentrifugation,Whilemonocyteswe

7、reisolatedfromPBMCbyadhesiontoplasticdishesformorethan2hat37℃.ImmatureDCsweregeneratedfrommonocytesbyculturinginPRMI1640mediumcontaining10%FBS,100ng/mLofgranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,50ng/mLofIL-4,andantibioticsfor6days.Morever,thephenotypesof