naf诱导急性单核细胞白血病thp-1细胞凋亡及机制初步探讨

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1、中图分类号UDC硕士学位论文学校代码10533NaF诱导急性单核细胞白血病THP-1细胞凋亡及机制初步探讨TheapoptosisinductionofNaFinhumanacutemonocyticleukemiaTHP．1cellsandtherelatedmechanisms作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：方鹏临床医学内科学(血液病学)湘雅医院血液科张国平(副教授)论文答辩日期塑兰：!步答辩委员会主席中南大学二0一一年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：玄塍日期：型§年』月堕日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供

3、信息服务。日期：丝年上月虫NaF诱导急性单核细胞白血病THP一1细胞凋亡及机制初步探讨摘要研究背景和目的：酯酶在生物体内的物质代谢和转运、细胞信号传递以及基因的表达中起重要作用。单核细胞中存在一系列对氟化钠(NaF)敏感而能被其抑制的非特异性酯酶。目前，国内外关于氟对机体影响的研究涉及到了各个系统。有学者研究发现，NaF可诱导肿瘤细胞凋亡。本实验通过观察NaF对THP．1细胞0【_醋酸萘酚酯酶(O【．NAE)活性的特异性抑制作用及其对THP．1细胞的增殖抑制和凋亡作用以及对凋亡相关基因Bcl．2和Bax表达的影响，初步探讨以此为基点的NaF诱导THP．1细胞凋亡

4、的可能机制，为急性单核细胞白血病的靶向治疗提供新的思路。方法：(1)以人急性单核细胞白血病细胞株THP．1细胞作为研究对象进行细胞培养，用不同浓度NaF(0、O．5、1、2、4、8mM)处理，其中0mM作为对照组；(2)瑞氏染色观察NaF处理前后THP．1细胞形态变化；(3)0【．NAE染色定性观察NaF对THP．1细胞0【．NAE活性的影响，显色法定量检测THP．1细胞中0c．NAE活性变化；(4)改良MTT法检测NaF对THP．1细胞的增殖抑制作用；(5)流式细胞术AnnexinV／PI检测NaF对THP．1细胞的凋亡作用；(6)RT-PCR检测NaF对TH

5、P．1细胞Bcl．2mRNA和BaxmRNA表达的影响。结果：(1)细胞形态学变化：倒置显微镜观察细胞培养结果，对照组细胞呈悬浮生长，圆形，大小均匀，折光性好，透明，背景清II亮；NaF作用24h后，细胞皱缩，大小不一，胞膜破损，轮廓模糊，甚至裂解消失，背景变混浊。瑞氏染色观察形态，NaF作用24h后细胞出现了凋亡形态变化，细胞大小不一，胞膜碎裂，边缘不整，胞质浓缩，核固缩，核染色质凝集，出现凋亡小体。(2)0c．NAE活性变化：NaF作用24h后，涂片做0【．NAE染色定性观察，可见随着药物浓度增加THP．1细胞Q．NAE反应阳性强度及阳性率逐渐降低；显色法定

6、量检测结果显示，THP．1细胞中0c．NAE活性随NaF浓度增加而降低(P<0．05)。(3)MTT结果：NaF在低浓度(O．5。lmM)时对T}口．1细●胞的增殖无明显抑制作用(胗O．05)；在高浓度(2．8mM)时抑制THP．1细胞增殖，且呈现出时间．剂量效应关系(氏O．05)。24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为：4mM、2．75mM、2．4mM。(4)AnnexinV／PI凋亡检测结果：NaF可诱导THP．1细胞凋亡，药物作用24h后，细胞凋亡率随药物浓度增高而增加，与对照组比较除O．5mM、lmM浓度组外差异均有统计学意义(P

7、5)。(5)RT-PCR结果：NaF作用24h后，在2-8mM浓度范围内，Bcl．2mRNA表达水平随药物浓度增加下降(氏O．05)，BaxmRNA表达水平随药物浓度增加而增高(氏O．05)。结论：(1)NaF在2．8mmol／L浓度范围内能剂量依赖性的抑制THP．1细胞增殖并诱导其凋亡，其机制之一可能是通的上调BaxmRNA表达和下调Bcl。2mRNA表达途径实现。(2)NaF诱导THP。1细胞凋亡的过程中伴随着0t．醋酸萘酚酯酶活性的下降，提示NaF特异性抑制单核细胞仅．醋酸萘酚酯酶可能在其诱导的THP．1细胞凋亡III中起了一定的作用；为急性单核细胞白血病

8、的靶向治疗提供了新思路。