中华眼镜蛇毒对hacat细胞增殖和凋亡的影响

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1、分类号：R758.6学校代码：10392学科专业代码：100206学号：2101003065福建医科大学硕士研究生毕业论文中华眼镜蛇毒对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响EffectsofNajaNajaAtraVenom(NNAV）ontheproliferationandapoptosisofahumankeratinocytecelllineHaCaT学位类型：医学硕士所在院（系）：福建医科大学第一临床学院研究生：程丽芳学科（专业）：皮肤病与性病学导师：程波教授研究起止日期：2012年3月至2013年2月答辩日期：2013年

2、5月28日二Ο一三年五月1目录原创性声明和授权书..................................................1目录................................................错误!未定义书签。摘要................................................错误!未定义书签。Abstract............................................................4引言..

3、..............................................错误!未定义书签。实验材料与方法......................................................9结果...............................................................16讨论...............................................................26小结.............

4、..................................................32结论................................................错误!未定义书签。参考文献............................................错误!未定义书签。致谢...............................................................36综述.............................

5、..................................372中华眼镜蛇毒对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响摘要目的：通过使用中华眼镜蛇毒干预体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞)，检测对其增殖和凋亡的影响以及可能机制，以探索其用于治疗银屑病的可能性，为下一步的体内实验以及临床实验运用于合理、有效治疗银屑病提供实验依据。方法：①角质形成细胞HaCaT的培养和传代。②CellCountingkit-8法确定蛇毒对HaCaT细胞的适用剂量及对其体外增殖的影响。③倒置光学显微镜观察正常组及凋亡细胞形态。④Annexin

6、Ⅴ/PI双染色法检测蛇毒不同浓度及不同干预时间细胞凋亡率的比较和变化，分别用倒置荧光相差显微镜观察及流式细胞仪测定凋亡坏死率。⑤分光光度法检测不同蛇毒浓度作用时caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性变化。结果：①.角质形成细胞HaCaT在光学显微镜下形态学观察显示细胞呈典型上皮样特征，贴壁后呈“铺路石”状。②CCK-8法中，浓度为1、2、4、8、16和32μg/ml蛇毒分别作用24h、48h和72h后，与对照组相比，眼镜蛇毒能抑制HaCaT细胞的增殖(P<0.05)，且抑制率升高具有浓度和时间依赖性。

7、③倒置荧光相差显微镜观察凋亡细胞形态显示凋亡晚期细胞可同时被AnnexinⅤ和PI双染，光镜显示细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变,每高倍显微镜视野下凋亡细胞的数量随蛇毒浓度的增加明显增多，且多见凋亡晚期的细胞。流式细胞仪测定HaCaT细胞均显示与对照组相比凋亡坏死率随着浓度增高及作用时间延长升高(P<0.05)。④分光光度法检测不同蛇毒浓度作用时caspase-3和caspase-9的活性随着蛇毒浓度的升高有明显增加，与对照组相比以及两两相比，P<0.05，差异具统计学意义；随着蛇毒浓度增大，相同时间干预后Caspase-8活

8、性无明显变化，P>0.05，差异无统计学意义。结论：1、中华眼镜蛇毒能在体外抑制HaCaT细胞的增殖。2、中华眼镜蛇毒可诱导HaCaT细胞的凋亡坏死，且以晚期凋亡和坏死为主。3、caspase-3和caspase-9在中华眼镜蛇毒诱导HaCaT细胞的过程中活性出现升高，Cas