小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较

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1、小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较辛颖"，张志强"，安宁2），张涛“，张建峰刀，张智英°（西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100;陕西省畜牧技术推广总站，西安710016）摘要本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色灾光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中转染48h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率结果显示，脂质体转染效率最高仅为&64%能满足对精原干细胞进一步实验的要求；电穿孔法效率最高达到25.27%但转化后细胞大量死亡；腺病

2、毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高，达到74.25%・因此慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法，矢键词精原干细胞(SSCs);转染效率；不同转染方法比较中图分类号Q223ComparisonofDifferentMethodsforSpermatogonialStemCellsTransfectionEfficienciesXINYingn，ZHANGZhi-Qiangn，ANNing2)，ZHANGTao0，ZHANGJian^cng2,，ZHANGZhi-Ying1,+(CollegeofAnimalScienceandTec

3、hnology>Northwest4&FUniversity，Yangling712100•Shaanxi，China；ShaanxiAnimalHusbandryTechnologyPromotionStation、Xi'an710016China)AbstractInthisstudy，wecompareddifferentmethodsusingadenovimslentivirus‘liposomesandelectroporationforefficienttransductionofpurifiedspermatogonialstemcells(

4、SSCs)•Theexpressionofgreenfluorescenceprotein(GFP)wereassayedbyflowcytometryaftercelltreatmentsfor48hours1Thehighestefficiencyofliposometransfectionwaslowas8・64%•Theelectroporationreached25.27%withsignificantofcelldeath1Themaximumefficiencyofadenoviralinfectionwasobservedtobe32.4%，

5、Thelentivirusinfectiongavethebestefficiencyof74.25%・WcconcludedthatthemostsuitablemethodtotransduceSSCsinvitrowastouselentivirusasthegenetransfervectors・Keywordspermatogonialstemcells(SSCs);transfectionefficiency;differenttransfectionmethods精原干细胞（spermatogonialstemcells（SSCs）是雄性动物体

6、内向子代传达遗传信息的生殖干细胞，具有高度的自我更新能力和分化潜能，对精原干细胞进行的改造可以直接影响后代的遗传性状精原干细胞在睾丸曲细精管的基膜上进行自我更新和分化⑴•精原干细胞细胞核较大，呈圆形，有丰富的线粒体和核糖体•一般在出生6-80龄的小鼠曲细精管生殖细胞悬液中，精原干细胞的比例较高⑵•由于精原干细胞既可以自我更新成新的干细胞，又可以不断增殖分化形成各阶段的生殖细胞3因此它对于临床医学、遗传育种、生物信息学等领域都具有广阔的的应用前景⑷•研究精原干细胞的生物学特性，探索体外长期培养和基因改造方法，运用冷冻保存和移植技术为转基因动物生产提供了新的技术

7、路线，1999年，宾夕法尼亚大学Ogawa等⑸首次将仓鼠精原干细胞收稿日期:2O13-O8-O8;接受日期:201349孚0国家垂点基础研究发展计划项目(973计划，No・2011CBA01002)联系人Tel:029-87092102;E-mail:zhangzliy®nwsuafedu1cnRcccivcd:August8f2013;Accepted:September30<2013SupportedbyNationalBasicResearchProgramofChina(973Program,NO-2011CBA01002)Corresponding

8、authorTel:029-87092102;Enn