tigar在ka受体介导的兴奋性毒性中的作用及机制

《tigar在ka受体介导的兴奋性毒性中的作用及机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文论文题目TIGAR在KA受体介导的兴奋性毒性中的作用及机制研究生姓名秦舒指导教师姓名秦正红专业名称药理学研究方向神经药理学论文提交日期2013年4月TIGAR在KA受体介导的兴奋性毒性中的作用及机制中文摘要TIGAR在KA受体介导的兴奋性毒性中的作用及机制中文摘要目的：在体外培养的SD大鼠胎鼠原代皮层神经元中，研究TIGAR在KA诱导的兴奋性毒性中的作用及其机制。方法：体外培养的大鼠胎鼠皮层神经元给予海人藻酸(KainicAcid，KA)处理，建立兴奋性毒性体外模型，CCK-8检测皮层神经元的存活率；Westernblot检测p53和TIGAR蛋白表达情况；CCK-8检测敲

2、除TIGAR对兴奋性毒性引起的神经损伤的影响，Westernblot检测敲除TIGAR对兴奋性毒性模型中IκBα、p-IκBα和Caspase-3表达变化的影响；免疫组织化学法检测兴奋性毒性模型神经元中NF-κB核转位、线粒体膜电位的变化；TUNEL检测TIGAR对神经元凋亡的影响。结果：本实验成功建立了大鼠胎鼠的原代皮层神经元的兴奋性毒性的体外模型。CCK-8结果显示，KA介导的兴奋性毒性可以引起神经元的损伤，并且具有一定的时间依赖性和剂量依赖性；敲除TIGAR可以减轻KA引起的神经元损伤。Westernblot结果表明，在KA介导的兴奋性毒性模型中，p53和TIGAR蛋白的表达水平

3、上调，p53抑制剂PFT-α(Pifithrin-α)预处理可以抑制KA引起的TIGAR上调。敲除TIGAR能够抑制KA引起的Caspase-3上调、IκBα降解及磷酸化。免疫组织化学结果显示，敲除TIGAR可抑制KA引起的NF-κB核转位、线粒体膜电位下降、TUNEL染色阳性细胞数目的增加。结论：在KA介导的大鼠胎鼠原代皮层神经元兴奋性毒性模型中，TIGAR的表达是依赖于p53的，敲除TIGAR可抑制KA受体介导的神经损伤，此作用可能是通过抑制KA受体介导的IκBα降解及磷酸化、NF-κB核转位、线粒体膜电位降低和细胞凋亡的机制来实现的。关键词：KA；TIGAR；p53；神经兴奋性毒

4、性；NF-κB作者：秦舒指导教师：秦正红教授IAbstractTherolesandmechanismsofTIGARinkainic-acidinducedexcitotoxicityinprimarycorticalneuronsTherolesandmechanismsofTIGARinkainic-acidinducedexcitotoxicityinprimarycorticalneuronsAbstractAim:TostudytherolesandmechanismsofTIGARinkainicacid-inducedexcitotoxicityinprimarycor

5、ticalneurons.Methods:TheculturedcorticalneuronsweretreatedwithKA(KainicAcid)toestablishtheexcitotoxicitymodelinvitro.CCK-8wasusedtodetectthesurvivalrateofcorticalneurons.Theproteinlevelsofp53andTIGARweredeterminedbyWesternBlotanalysis.Intheexcitotoxixitymodel,theinjuryofneuronswasdetectedbyCCK-8

6、afterknockdownofTIGAR.TheproteinlevelsofIκBα,p-IκBαandCaspase-3wereassessedwithWesternBlot.TheeffectsofTIGARonKA-inducedactivationofNF-κB,downregulationofmitochondrialmembranepotentialandupregulationofTUNEL-positiveneuronswereanalyzedbyimmunofluorescenceanalysis.Results:Wehavesuccessfullyestabli

7、shedthemodelofexcitotoxicitybyKAinvitro.ExicitotoxicneuronalinjurywasinducedafterKAtreatmentasdemonstratedbyCCK-8andwassignificantlyinhibitedbyknockdownofTIGAR.Westernblotshowedthattheexpressionofp53andTIGARwasmarkedlyupregu