应用hrm法检测结直肠癌患者kras和egfr基因突变

《应用hrm法检测结直肠癌患者kras和egfr基因突变》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号B21UDC610硕士学位论文学校代码lQ533密级公开应用HRM法检测结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变HighresolutionmeltinganalysisofKRASandEGFRmutationincolorectalcancer作者姓名：尹苹学科专业：临床医学研究方向：临床检验诊断学学院(系所)：医学检验系指导教师：徐克前教授论文答辩日期塑陟●兰答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明IIIIIIIIIIIIIIIIlUIY2424691本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的

2、研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—址日期：丝年￡月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权

3、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储签名：红一翩签名豳嘿丝年上月』应用HRM法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变摘要目的：研究高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting，HRM)分析法检测结直肠癌患者DNA中KRAS基因和EGFR基因突变，建立一种简单、可靠的检测KRAS和EGFR基因型方法。方法：收集在中南大学湘雅医院和湖南省肿瘤医院2012年9月至2012年12月病理学确诊为结直肠癌患者血标本70例。提取患者血样

4、本中的基因组DNA，设计PCR引物并扩增目的基因片段，用HRM法检测结直肠癌KRAS基因2号和3号外显子、EGFR基因19和21号外显子的突变，同时采用Sanger测序法验证HRM法的准确性，并通过双侧#检验分析两种方法之间的差异性。结果：在70例样本中，用HRM法检测KRAS基因2号外显子有18例突变，分别为G12D(6例)、G12C(9例)、G12V(3例)，通过测序法检测KRAS基因2号外显子有17例突变；KRAS基因3号外显子未发生突变、EGFR基因19号外显子有3例突变、EGFR基因21号外显子未发生突变。利用

5、统计学软件SPSS16．0分析得出两种检测方法之间并没有显著性差异。结论：高分辨率熔解曲线分析法进行基因分型与测序法检测的结果基本相同，HRM法还具有高的分辨率、准确度、灵敏度等特点，与测序法相比，HRM法操作更简单、结果容易读取、更能节约检测时间和检测成本，因此适合在临床推广应用。图13幅，表3个，参考文献35篇。关键词：高分辨率熔解曲线；KRAS基因；EGFR基因；结直肠癌分类号：R71IIHighresolutionmeltinganalysisofKRASandEGFRmutationincolorectalca

6、ncerAbstractObjective：Tostudythefeasibilityofhighresolutionmelting(陬M)of删SandE㈣genemutationincolorectalcancer．TheeffectiveandfeasibilitymethodtodetectthepolymorphismofKMSandEGFRwouldbebeneficialtopreventanddiagnosethecolorectalcancer,andwouldbehopefultoinventthen

7、ewtreatments．Methods：Inthisstudy,the70patientswithclinicallydiagnosedcolorectalcancerwereselectedfromXiangyahospitalofCentralSouthUniversityandProvincialTumorHospitalfromSeptember2012toDecember2012．GenomicDNAwasextractedandpurifiedfrombloodsampleswhichfromthepati

8、entsdonated．DesignedtheprimersofPCRandamplifiedtheK砌Sexon2，删Sexon3，E㈣exon19andE锄exon21respectively．Thegenotypeof删‘SrandE锏weredetectedusing职M，andmeanwhilechecke