斑马鱼lamin a基因编码序列的克隆与lamin a-egfp-pcs2+重组质粒的构建

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1、《中国图书资料分类法》分类号：R394.3单位代码：10660学号：S100149贵阳医学院2013届临床医学硕士专业学位材料(临床论文部分)斑马鱼LaminA基因编码序列的克隆与2+LaminA-EGFP-pCS重组质粒的构建研究生：叶芝旭导师：何志旭年级：2010级专业：儿科学2013年5月10日目录摘要.............................................................................................................1略缩词表...........................

2、..........................................................................2前言.............................................................................................................4材料与方法.................................................................................................6结果....

3、.......................................................................................................21讨论...........................................................................................................27参考文献............................................................................

4、.......................33致谢...........................................................................................................36英文摘要...................................................................................................38论文原创性声明................................................

5、......................................39综述...........................................................................................................40附：临床能力考核有关材料：临床轮转考核表(按时间顺序)学术活动情况表(按时间顺序)临床能力考试及学位答辩情况表贵阳医学院2013届硕士研究生论文斑马鱼LaminA基因编码序列的克隆与2+LaminA-EGFP-pCS重组质粒的构建专业：儿科学研究生：叶芝旭导师：何志旭摘要2+目的克隆斑马鱼

6、LaminA的基因编码序列，并构建LaminA-EGFP-pCS的重组质粒，用SP6酶制备正义的mRNA。方法收集多个时相的野生型斑马鱼胚胎，TRIZOL法提取总RNA，RT-PCR法扩增LaminA基因编码序列，将得到的LaminA与2+2+EGFP-pCS分别用BamHI、EcoRI酶双酶切后,将LaminA插入EGFP-pCS质粒中。对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及插入片段进行测序鉴定后，用NotI酶线性化质粒，通过SP6酶体外转录合成了融合了EGFP的LaminAmRNA。结果通过RT-PCR2+技术扩增出1977bp的LaminA扩增产物，构建的LaminA-EGFP-pC

7、S重组质粒经双酶切、菌落PCR及插入片段的测序后与预期结果相符，用SP6酶体外转录获得的5‘端加帽的正义mRNA，通过胚胎显微注射，观察到绿色荧光蛋白的表达。结论克2+隆了斑马鱼LaminA基因编码序列，并构建了LaminA-EGFP-pCS重组质粒，并制备了5‘端加帽的正义mRNA。关键词：斑马鱼，核纤层蛋白A，质粒构建，体外转录，SP6,显微注射,信使核糖核酸[基金项目]：国家自然科学基金面上项目（31260284）香港大学周中军教授协作课