新生期母婴分离致大鼠海马细胞凋亡的信号机制

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1、中图分类号：R722.12；R331.1硕士学位论文新生期母婴分离致大鼠海马细胞凋亡的信号机制院（系）、所临床医学院研究生姓名张建彬学科、专业儿科学(新生儿专业)导师姓名董文斌教授二Ο一三年四月本研究基金来源：泸州医学院青年基金和泸州市科技局重点项目〔2010-S-13(5/9)〕目录1新生期母婴分离致大鼠海马细胞凋亡的信号机制…………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言…………

2、…………………………………………………51.4材料与方法……………………………………………………71.5结果……………………………………………………………131.6讨论……………………………………………………………171.7结论……………………………………………………………261.8参考文献………………………………………………………301.9英汉缩略词对照表……………………………………………382致谢……………………………………………………………393高同型半胱氨酸与海马神经元细胞凋亡（综述）………………………

3、…………………………………………404攻读硕士学位期间撰写和发表的论文………………………40新生期母婴分离致大鼠海马细胞凋亡的信号机制摘要目的建立新生期母婴分离大鼠模型，观察母婴分离对大鼠海马神经元细胞发育过程中凋亡的影响和半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、小窝蛋白-1（Caveolin-1）的表达,初步探讨新生期母婴分离导致大鼠成年后行为发育异常的可能机制。方法新生Wistar大鼠48只，随机分为分离组(N)和对照组(C)，每组24只，N组和C组每组又分为三个亚组，各8只。N组于出生后第2~21d每

4、天与母鼠分离3小时（8:00~11:00am），C组不做任何处理，生后一直与母鼠同笼。在出生后第7d、14d和21d断头处死大鼠并取其大脑，固定后作冠状面石蜡切片。采用原位末端标记法（TUNEL）检测各组海马区神经元细胞凋亡情况,免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-peroxidase,SP）法检测组织半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和小窝蛋白-1（Caveolin-1）的表达。应用Image-ProPlus(IP

5、P)6.0图像分析系统对免疫组化图像作半定量分析。结果⑴以出现棕黄色颗粒作为阳性判断标准,TUNEL阳性凋亡细胞和Caspase-3的表达主要发生在海马锥体细胞；Caveolin-l主要于海马神经胶质细胞。⑵TUNEL法检测凋亡结果：C组与N组海马TUNEL阳性细胞均以7d时最多，C组与N组均随日龄增加TUNEL阳性细胞逐渐减少，同一时间点与对照组比较,N组（凋亡指数Apoptoticintex,AI:7d:22.62±0.68vs18.38±2.26；14d:12.23±0.97vs9.51±1.44；1d:

6、8.14±0.93vs5.60±0.63）1明显增多(P<0.01),差异具有统计学意义（P<0.01）。(3)Caspase-3蛋白在大鼠海马组织中的表达：C组与N组海马Caspase-3蛋白表达均以7d时最多，随日龄增加而逐渐减少;同一时间点与对照组比较（7d:0.29±0.03vs0.24±0.01；14d:0.22±0.01vs0.18±0.02；21d:0.16±0.01vs0.13±0.01）明显增加(P<0.01),差异具有统计学意义（P<0.01）;Caspase-3的表达分布与TUNEL染色基

7、本一致。(4)Caveolin-1蛋白在大鼠海马组织中的表达：对照组与分离组海马Caveolin-1蛋白表达均随日龄增加而逐渐增多，同一时间点与对照组比较（7d:0.13±0.01vs0.12±0.01）无明显减少,差异无统计学意义(P＞0.05)；（14d:0.19±0.01vs0.22±0.01；21d:0.24±0.01vs0.29±0.01）明显减少，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论新生期母婴分离可导致大鼠发育过程中海马神经元细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达增多，小窝蛋白（Caveolin-

8、1）表达减少,这可能与生命早期母婴分离导致成年后的行为发育异常有关。关键词母婴分离；海马神经元；凋亡；半胱氨酸蛋白酶-3；小窝蛋白-12TheSignalMechanismsofHippocampusNeuronApoptosisoftheNewbornRatAfterMaternalSeparationinNeonatalPeriodAbstractObjectiveTodetect