余珉caveolin-1分子在超微细炭黑颗粒入胞途径中的作用

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1、CaveolinCaveolin--11分子在超微细炭黑颗粒分子在超微细炭黑颗粒(CBNP)(CBNP)入胞途径中的作用入胞途径中的作用浙江省医学科学院浙江省医学科学院卫生学研究所卫生学研究所余余珉珉前言前言材料与方法材料与方法结果结果结论结论前言前言CBNP理化特性CBNP固有理化特性粒径(nm)表面积（BET）(g/m2)密度(g/cm3)化学成分多环芳香烃类(ng/g)内毒素(EU/g)CBNP在肺泡微环境中的特性多分散性指数Zeta电位（mv)物理形态聚集性圆形颗粒物粒径分布特征具有一定聚集倾向（松散状聚

2、集物）集聚物粒径分布主峰为2.6µm部分内容摘自ToxicolSci.2012June;127(2):474–484前言前言CBNP暴露环境及接触途径职业接触日常生活接触涂料业塑料业天然气、石油、橡胶业油墨印刷业机油等燃烧产物前言前言CBNP健康危害问题研究侵肺脏损入心血管细胞伤效应系统损伤抑制肝脏损吞伤效应噬功能统系环循入侵前言前言CBNP健康危害问题研究Caveolin-1/胞膜窖入胞机制部分图片摘自ParticleandFibreToxicology2010,7:10材料与技术方案材料与技术方案CBNP购自

3、Cabot公司A549细胞购自ATCC公司（Carbonpeal480)CBNP染毒24h0、25、50、100、200、400μg/mL粒径为（25-60）nm台盼蓝染色法筛选出细胞存活率超过85%的染毒剂量荧光检测技术透射电镜技术流式细胞技术CBNP入胞分布特征CBNP入胞散射角参数分析蛋白印迹技术药物nac抑制活性氧分析Caveolin-1蛋白水平分析试验药物Filipin抑制试验Caveolin-1蛋白在CBNP入胞中的作用细胞毒性检测结果细胞毒性检测结果图1CBNP对A549细胞活性的影响注*:同对照组

4、比较p＜0.05；流式细胞仪检测流式细胞仪检测结果结果0µg/mL25µg/mL50µg/mL100µg/mL1.6(Treated/Control)RatioofSSCs1.4*1.2**10.80.60.40.2002550100Dose(µg/mL)图2CBNP对A549细胞侧向角散射参数的影响注*:同对照组比较p＜0.05透射电镜检测结果透射电镜检测结果0µg/mL25µg/mL50µg/mL100µg/mL图3CBNP对A549细胞形态的影响及其在细胞内的分布注：*细胞膜内陷，其间含有颗粒物细胞浆内吞噬

5、小泡，内含颗粒物荧光酶标仪检测结果荧光酶标仪检测结果图4CBNP单独处理或CBNP+NAC对A549细胞活性氧生成水平的影响注:*同对照组比较p＜0.05#同CBNP单独处理比较p＜0.05蛋白印迹实验蛋白印迹实验结果结果图5CBNP对A549细胞caveolin-1蛋白表达水平的影响注*:同对照组比较p＜0.05蛋白印迹实验结果蛋白印迹实验结果#图6CBNP单独处理或CBNP+NAC对A549细胞caveolin-1蛋白表达水平的影响注#:同CBNP单独处理比较p＜0.05流式细胞仪检测结果流式细胞仪检测结果0

6、µg/mLFilipin100µg/mL100µg/mL+Filipin1.61.4*#(Treated/Control)RatioofSSCs1.210.80.60.40.200100Filipin100+FilipinDose(µg/mL)图7CBNP单独处理或CBNP+Filipin处理对A549细胞侧向角散射参数的影响注*:同对照组比较p＜0.05，#同CBNP处理组比较p＜0.05结论结论CBNP1.CBNP能通过上调ROS水平促进A549细胞NAC×Caveolin-1的表达。CBNP×Filipin

7、ROSSSC2.CBNP入胞过程可为流式细胞术测得的细胞侧向散射角参数（SSC）反映，表现为SSC数值升高，可能与含CBNP质膜囊泡数量的增多Caveolin-1有关。3.Caveolin-1/胞膜窖抑制剂Filipin能少量抑制A549细胞SSC数值。谢谢！谢谢！