星形胶质细胞条件培养液对缺氧复氧损伤神经元的保护作用及其机制探讨

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1、学校代码!鱼垒59学号或申请号2QQ8Q丝密级．一金盘郑*l大孥专业博士学位论文星形胶质细胞条件培养液对缺氧／复氧损伤神经元的保护作用及其机制探讨作者谭军许予明医学神经病学郑州大学第一附属医院2013年3月●●名名类称系问姓姓门名院时师科业养成导学专培完AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofdoctorTheProtectiveEffectofAstrocyte·conditionedMediumontheHypoxia／ReoxygenationdamagedNeuronsandApproachingto

2、itsMechanismByJunTanSupervisor：Prof．YumingXuNeurologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch，2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：÷臻日期：∥f3年丁月∥日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关

3、的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑少I'1大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：÷辫日期：∥f弓年r月形日摘要星形胶质细胞条件培养液对缺氧／复氧损伤神经元的保护作用及其机制探讨博士研究生：谭军导师：许予明郑州大学第一附属医院神经内科河

4、南郑州450052背景由于人们物质生活得到极大改善，老年人口逐年增加，导致罹患脑血管病人人数迅速增加，目前脑血管疾病己占我国致残和致死性病因第一位，并且患病人数有逐年增多的趋势，而缺血性卒中占脑血管疾病的80％85％。缺血性卒中不仅对人类健康造成了巨大的威胁，还给患者家庭和社会带来了严重的负面影响。然而，至今尚无一种对所有缺血性卒中有确切疗效的治疗方法，因此寻找新的治疗缺血性卒中的方法非常必要。在研究短暂性脑缺血发作过程中，发现了脑组织的缺血预处理；缺血预处理在临床中是一种不切实际的治疗方法；为了消除缺血造成的创伤，有人提出了药物预处理，即通过药物激发或模拟机体内源性物质，如腺苷、

5、缓激肽和一氧化氮(nitricoxide，NO)等而发挥保护作用。腺苷(adenosine，Ado)及其受体在多种脏器缺血再灌注损伤的保护方面有重要作用。正常情况下脑细胞外液腺苷水平为30～300nmol／L，而在脑缺血等病理状态下，可达到5-40umol／L，最多可达正常时的200多倍。由此可见，急剧增加的腺苷可能是一种内源性的神经保护反应。星形胶质细胞(astrocyte，AS)主要存在于在中枢神经系统中，对神经元有支持和营养作用。激活后的星形胶质细胞可以释放多种神经递质；当机体遇到组织缺血等病理状态下时，星形胶质细胞释放的物质会明显增加，保护受损神经元并加速病损神经元的功能恢

6、复。大量的体外细胞培养实验也证实了星形胶质细胞条件培养液(astrocyte-conditionedmedium，ACM)中含有多种神经元营养物质，提示ACM的确能够提高损伤神经元的存活率并且加快其功能恢复。虽然星形胶质细胞对神经元的保护作用已被学者们公认，但其作用机制不是很清楚，ACM对受损神经元的营养作用也需进一步探讨。摘要本课题利用原代细胞培养技术得到星形胶质细胞和神经元，建立模拟脑缺血再灌注损伤模型，用ACM、ACMa及ACM+a干预缺氧损伤的神经元：倒置显微镜下观察星形胶质细胞及神经元形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡结果：xTT法测定其活性，利用免疫荧光技术和免疫细胞化

7、学技术分别测定神经元特异性稀醇化酶(neuron-speeificenolase，NSE)强阳性细胞的表达量，各组神经元细胞中caspase一3蛋白表达及活性检测，应用Westernblot分析各组神经元caspase．3的活性。以此来分析星形胶质细胞与腺苷对缺氧／复氧损伤神经元的保护作用，探讨腺苷预处理后的星形胶质细胞培养液的营养性作用，从而进一步揭示腺苷对神经系统的保护机制，为腺苷应用于临床治疗脑血管疾病奠定理论基础。目的分析星形胶质细胞与腺苷(adenosine