植物乳杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞内sbd-1基因表达的影响

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1、分类号S852.11学校代码10129UDC636.09学号2010201035植物乳杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因表达的影响EffectsofLactobacillusPlantarumontheExpressionofSBD-1inEpithelialCellsofRumenintheMongolianSheep申请人：李砚学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：动物解剖学与粘膜免疫指导教师：杨银凤教授论文提交日期：二〇一三年六月本研究由国家自然基金项目（31160491）提供资

2、助摘要防御素(defensins)是动物体内先天性免疫系统的主要成员之一，具有广谱的抗微生物活性，广泛表达在动物组织细胞中，它的表达受到多种因素的影响，其中益生菌是影响因素之一。本试验选用益生植物乳杆菌研究对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞内防御素表达的影响。首先建立稳定的绵羊瘤胃上皮细胞培养体系，在无菌条件下获取传一代绵羊瘤胃上皮细胞，并通过形态学、绘制生长曲线和免疫组化方法对其进行鉴定，然后将活化并纯化好的植物乳杆菌和体外培养的传一代绵羊瘤胃上皮细胞进行共培养，通过不同的菌液浓度和不同的刺激时间，

3、利用荧光定量PCR技术研究接受刺激后瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1（SheepBeta-Defensin-1，SBD-1）基因表达水平的差异。结果表明：通过鉴定，证实所培养的细胞具有典型的上皮细胞特征，并且生长状态良好，适合作为下一步研究的试验模型。通过植物乳9杆菌和瘤胃上皮细胞共培养后发现，当菌液浓度为10cfu/ml刺激上皮细胞8h后，SBD-1的876表达量达到最高水平，当菌液浓度为10、10和10cfu/ml时的表达量与空白对照基本持平。10987通过比较当菌液浓度为10和10cfu/

4、ml刺激下SBD-1的表达量与浓度为10、10和610cfu/ml的表达量相比差异极显著（P﹤0.01）。本试验结果提示植物乳杆菌能够诱导绵羊瘤9胃上皮细胞内SBD-1基因表达增加，且菌液浓度为10cfu/ml、刺激8h表达量最大。关键词：β防御素；瘤胃上皮细胞；植物乳杆菌；诱导表达EffectsofLactobacillusPlantarumontheExpressionofSBD-1inEpithelialCellsofRumenintheMongolianSheepAbstractDefe

5、nsins，asanimportantmemberintheinnateimmunesystemofanimals，havebroad-spectrumantimicrobialactivityandwidelyexpressedinanimaltissues.While,avarietyoffactorscouldaffectitsexpressionandtheprobioticistheone.Inourresearch，LactobacillusPlantarumwasusedtoaff

6、ecttheexpressionofdefensinsinsheeprumenepithelialcells．Thestableculturesystemofrumenepithelialcellwasestablished,andthentherumenfilialgenerationepitheliumcellswereobtainedandidentifiedthroughmorphology,growthcurveandimmunohistochemicalmethods.Afterth

7、at,theactivatedandpurifiedLactobacillusPlantarum,whichweredividedintodifferentbacterialconcentrations,wereculturedwithgenerationrumenepithelialcellsindifferentstimulationtimeandwemeasuredtheexpressionofSBD-1ofthestimulatedrumenepithelialcellsusingqPC

8、R（Real-timequantitativePCR）technology.Theresultsshowedthattheculturedcellshavethetypicalcharacteristicsofepithelialcellsthroughtheidentification,andthecellscouldbeusedinthefollowingstudy.AfterepithelialcellsandLactobacillusPlantarumwereco-cultured,we