牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良

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1、牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良分类号：密级：学号：2010108049单位代码：10759石河子大学硕士学位论文牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良学位申请人石刚指导教师剡根强教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称预防兽医学研究方向动物传染病诊断与防治所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年6月ScreeningadjuvantfortheinactivatedvaccineofMycoplasmabovisandtheimprovementofMycoplasmabovismediumI牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良ADissertation

2、SubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByShiGang(PreventiveVeterinaryMedicine)DissertationSupervisor:Prof.YanGen-qiangJune,2013II牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良摘要III牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良牛支原体(Mycoplasmabovis，M.bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和奶牛乳房炎的主要病原体，近年来，由牛支

3、原体感染引起的相关疾病已蔓延至全世界，2010年以来，新疆北疆部分地区规模化牛场犊牛陆续出现严重的肺炎与关节炎，造成大批犊牛死亡，后经实验室诊断确定病原体为牛支原体。目前，国内尚无预防该病的商品化疫苗供生产应用，而抗生素治疗常存在盲目用药，疗效不确定等情况。为了解决上述问题本试验着重开展了以下研究：1.将分离并鉴定得到的牛支原体新疆分离菌株进行扩大培养制备灭活菌悬液，然后分别与弗氏完全佐剂、白油佐剂、氢氧化铝佐剂、蜂胶佐剂配合，制成灭活疫苗免疫小鼠，通过测定血清中的抗体水平来筛选免疫效果较好的疫苗佐剂。结果表明白油佐剂组的免疫增强效果最佳，产生的抗体水平最高，并且高抗体水平持续时

4、间较长，可以作为牛支原体灭活疫苗的较理想佐剂。2.在常用牛心汤培养基基础上进行了改良，将配方中原有牛心汤进行了2倍浓缩并加入了DMEM和牛肺消化液，利用活菌计数法、菌体蛋白测定法、OD值测定法对牛支原体新疆分离株在改良后的液体培养基中不同培养阶段的生长滴度即颜色变化单位（CCU）、菌体蛋白量及OD值进行了测定，并采用平板菌落计数法（CFU）对牛支原体新疆分离株在三种固体培养基中的菌落数进行了测定。结果表明改良后的培养基配方培养效率明显提高，有助于牛支原体的大量培养。3.选择临床常用的恩诺沙星、乳酸环丙沙星、盐酸林可霉素、泰乐菌素、阿奇霉素、替米考星、氧氟沙星、氟苯尼考八种药物，采

5、用两倍稀释法对牛支原体进行体外最小抑菌浓度的测定，为指导临床合理用药提供依据。结果表明牛支原体对恩诺沙星的耐药性最低，适用于当前治疗牛支原体感染性疾病。关键词：牛支原体；疫苗佐剂；ELISA；改良培养基；最小抑菌浓度（MIC）AbstractMycoplasmabovis(M.bovis)isanimportantcauseofpneumoniaandarthritisinyoungcalves,andmastitis.Inrecentyears,thecattlediseasecausedbyM.bovishasspreadwidelytoallpartsoftheworld.

6、Since2010,insomeareasoftheNorthofXinjianglarge-scaledairycalvessuccessivelybrokeoutseverepneumoniaandarthritisthatresultedinthedeathsofmorethan10calves.ThelaboratorydiagnosisconfirmedpathogenwasMycoplasmabovis.Atpresent,therewerenovaccinesforpreventionandcontrolofMycoplasmabovisdiseaseinourco

7、untry,onceoutbreaksofdiseaserelyingmainlyonantibiotictreatment.Butnowtherearewidevarietyofantibiotic,blindmedicationandbadtreatment.Inordertosolvetheaboveproblems,theIV牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良experimenthasfocusedonthefollowingresearch:1．Toevaluat