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1、园艺学报2008,35(12):1787-1794ActaHorticulturaeSinica甘菊BADH基因启动子的克隆与瞬时表达分析1,41331,23刘振林,曹华雯,夏新莉,尹伟伦,戴思兰123(北京林业大学园林学院,北京100083;国家花卉工程技术研究中心,北京100083;北京林业大学生物科学与技4术学院,北京100083;河北科技师范学院园艺园林系,河北昌黎066600)摘要:为了给菊花[Dendronthema×grandiflora(Ramat.)Kitam.]的转基因育种提供诱导型启动子,借鉴5′RACE策略,利用锚定PCR步移的方法克隆了
2、甘菊[Dendranthemalavandulifolium(Fisch.exTrautv.)Makino]甜菜碱醛脱氢酶(betainealdehydedehydrogenase,BADH)基因的4个启动子序列,分别命名为DBP11、DBP12、DBP21和DBP22(GenBank登录号:DQ497620～DQ497623),序列长度分别为1230、1249、1273和574bp。4个启动子序列对应区域的同源性在89%以上。其中DBP12和DBP21分別是甘菊BADH基因DlBADH1和DlBADH2(GenBank登录号:DQ011151和DQ011152
3、)的启动子序列,DBP11和DBP22为甘菊BADH基因家族中其它成员的启动子序列。序列分析表明,上述启动子序列中均含有多处与水分胁迫和脱落酸诱导相关的顺式作用元件。在表达载体pCAMBIA130512的基础上,用所克隆的4个甘菊BADH基因启动子序列分别置换驱动其报告基因表达的35S启动子,建立了新的植物表达载体。用其转化农杆菌,并用叶盘法侵染甘菊,瞬时表达的结果表明这些启动子序列均具备驱动报告基因表达的功能。关键词:甘菊;甜菜碱醛脱氢酶基因;启动子;克隆;瞬时表达+中图分类号:S682111文献标识码:A文章编号:05132353X(2008)1221787
4、208CloningandTransientExpressionAssayofBADHGenePromotersfromDendronthemalavandulifolium1,41331,23LIUZhen2lin,CAOHua2wen,XIAXin2li,YINWei2lun,andDAISi2lan12(CollegeofLandscapeArchitecture,BeijingForestryUniversity,Beijing100083,China;ChinaNationalCenterforFlowerEngi23neeringTechnique,
5、Beijing100083,China;CollegeofBiologyScienceandTechnology,BeijingForestryUniversity,Beijing4100083,China;DepartmentofHorticultureandLandscapeArchitecture,HebeiNormalUniversityofScienceandTechnology,Changli,Hebei066600,China)Abstract:Inordertoprovideinduciblepromoterforchrysanthemum[De
6、ndronthema×grandiflora(Ra2mat.)Kitam.]transgenicbreeding,referringtothestrategyof5′RACE,fourpromotersequencesofbetainealdehydedehydrogenase(BADH)genefromDendranthemalavandulifolium(Fisch.exTrautv.)MakinowereclonedbyanchoredPCRwalking,whichwerenamedDBP11,DBP12,DBP21andDBP22(GenBankacc
7、es2sionNo.DQ497620-DQ497623).Thefoursequencesare1230bp,1249bp,1273bpand574bpre2spectively.Thehomologyofthecorrespondingregionsbetweeneverytwosequencesisabove89%.DBP12andDBP21arethepromotersofDlBADH1andDlBADH2(GenBankaccessionNo.DQ011151andDQ011152),DBP11andDBP22arethepromotersofother
8、membersinBAD
