绿原酸体外抑制肠道病毒71型的效应机制

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1、硕士学位论文论文题目绿原酸体外抑制肠道病毒71型的效应机制研究生姓名李祥指导教师姓名史伟峰（教授）专业名称临床检验诊断学研究方向免疫与微生物论文提交日期2013年4月绿原酸体外抑制肠道病毒71型的效应机制中文摘要绿原酸体外抑制肠道病毒71型的效应机制中文摘要目的：探讨绿原酸对肠道病毒71型（EV71）的抑制作用及分子机制。方法：（1）斑块形成试验检测不同浓度绿原酸对EV71感染的抑制作用；（2）噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度绿原酸和利巴韦林对RD细胞的细胞毒作用；病毒斑块减少试验分析绿原酸对EV71吸附

2、作用的影响；（3）时间过程试验检测绿原酸抑制效用与病毒生命周期的相关性；（4）绿原酸处理RD细胞后，采用RT-PCR和Western-Blotting法检测不同时间点EV71/VP1、2A、3C和3DmRNA及蛋白酶的表达。结果：（1）绿原酸在5、10和20µg/mL剂量时对EV71具有良好的抑制率，分别为83.4±3.0%、88.7±1.9%和94.7±1.8%，其半数抑制浓度（IC50）=45.7µg/mL。利巴韦林在20、40和80µg/mL剂量时对EV71具有良好的抑制率，分别为84.5±1.1

3、%、95.6±2.2%和85.4±4.6%，其IC50=195.2µg/mL；（2）绿原酸低于50µg/mL剂量处理时，细胞活率与空白对照组相比较并没有显著下降，其半数细胞毒性浓度（CC50）=143.5µg/mL。而利巴韦林低于150µg/mL时对RD细胞的存活率亦无明显影响，其CC50=1187.2µg/mL；（3）20μg/mL绿原酸与病毒同时加入或病毒吸附1h后加入，两种方法不同时间点细胞裂解液上清病毒滴度的降低差异无统计意义（P>0.05）；（4）绿原酸在EV71感染RD细胞后0-8h加入，能

4、显著抑制EV71复制；而在EV71感染后10-24h加入绿原酸，仅有部分或轻微抑制EV71复制效应；（5）EV71感染RD细胞后4h和8h绿原酸可阻碍EV71/2AmRNA表达，但未影响EV71/VP1、3C和3DmRNA表达；（6）绿原酸处理EV71感染RD细胞后4h和8h，未能检测出EV71/2A蛋白酶，但EV71/VP1、3C和3D蛋白表达未受影响。结论：（1）绿原酸具有良好的抑制EV71病毒复制效用；（2）绿原酸对EV71感染的抑制效应与阻止病毒吸附无关；（3）绿原酸主要通过干扰EV71复制早期

5、2AmRNA表达和蛋白翻译而发挥抗病毒效应。I中文摘要绿原酸体外抑制肠道病毒71型的效应机制关键词：绿原酸；EV71；2A蛋白酶；3C蛋白酶作者：李祥指导老师：史伟峰IIStudyontheeffectandmechanismofchlorogenicacidagainstenterovirus71invitroAbstactStudyontheeffectandmechanismofchlorogenicacidagainstenterovirus71invitroAbstactObjective:T

6、oexploretheinhibitoryeffectandmolecularmechanismofchlorogenicacid(CHA)againstenterovirus71(EV71).Methods:TheinhibitoryactivitiesofCHAagainstEV71indifferentconcentrationswereevaluatedbyplaqueformingtest,andthecytotoxiceffectsofCHAandRibavirinindifferentco

7、ncentrationsonRDcellsweretestedbyMTTassay.TheeffectsofCHAonEV71adsorptionwereanalyzedbyplaquereductionassay.Inaddition,theCHAonEV71replicationwasdetectedbytimecourseanalysis.Furthermore,theexpressionandtranslationofVP1,2A,3Cand3DinEV71-infectedRDcellstre

8、atedwithCHAwerealsoanalyzedbyRT-PCTandWestern-Blotting.Results:CHApossessedeffectiveinhibitiononEV71infectionat5,10and20µg/mL,andtheinhibitionrateswere83.4±3.0%,88.7±1.9%and94.7±1.8%,respectively.RibavirinalsoinhibitedEV71