采用pcr-dgge方法测定枸杞多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用

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1、单位代码：10222学号：10813019分类号：佳木斯大学硕士学位论文论文题目：采用PCR-DGGE方法测定枸杞多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用研究生姓名：程翔学科、专业：免疫学导师姓名、职称：杨景云教授论文答辩日期：2013年6月6日佳木斯大学硕士学位论文佳木斯大学硕士学位论文论文题目：采用PCR-DGGE方法测定枸杞多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用研究生：程翔专业：免疫学指导教师：杨景云教授单位：佳木斯大学协助指导教师：马淑霞教授单位：佳木斯大学学习期限：2010年9月至2013年6月学位授予单位：佳木斯大学I佳木斯大学硕士学位论文学

2、术诚信承诺本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得佳木斯大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。签名：___________日期：___________关于论文使用授权的说明本人完全了解佳木斯大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以

3、采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________II佳木斯大学硕士学位论文目录一、中文摘要IV二、英文摘要V三、前言1四、文献综述2五、材料与方法16六、结果27七、讨论33八、结论36九、参考文献37十、致谢42十一、英文缩写43十二、附图44III佳木斯大学硕士学位论文摘要目的：使用分子生物学的PCR-DGGE法分离肠道细菌16SRNAV3可变区的PCR产物，经DGGE图谱条带分析，结合传统的微生物分离、培养、鉴定方法，探讨

4、枸杞多糖对肠道微生态失调模型小鼠的调节作用。方法：首先采用给小鼠灌胃盐酸林可霉素的方式，制作出小鼠肠道微生态失调模型。随后将模型小鼠分为丽珠肠乐组、自然恢复组和枸杞多糖组，分别给予相应药物治疗。灌胃七天后，处死所有小鼠，采集回盲部粪便标本。梯度稀释粪便标本，而后采用传统的活菌培养和提取总DNA以及PCR-DGGE方法检测小鼠肠道菌群DNA。最后将所有数据收集分析，观察枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠的治疗效果。结果：传统活菌培养结果显示：小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌升高，肠杆菌、肠球菌下降，枸杞多糖组和丽珠肠乐组与自然恢复组比较，差异非常有显著性

5、（P<0.01）。枸杞多糖组与丽珠肠乐组相比，差异有显著性（P<0.05）。PCR-DGGE结果显示：粪便样本提取总DNA浓度测定值方面，枸杞多糖组和丽珠肠乐组高于自然恢复组（P<0.05），DGGE的多样性指数分析结果为，丽珠肠乐组和枸杞多糖组大于自然恢复组和正常对照组，差异有显著性（P<0.05）；枸杞多糖组稍优于丽珠肠乐组，但统计学无明显差异。结论：给小鼠灌胃盐酸林可霉素可以成功制造小鼠肠道微生态失调模型。传统活菌培养和PCR-DGGE的结果均证明，枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠具有显著的调整作用。PCR-DGGE技术因具有全面性、灵敏

6、度高、节省时间、无需微生物培养等优点，较传统培养法具有显著的优势。PCR-DGGE技术是诊断微生态失调、评价微生态调节剂作用的有力工具。关键词：PCR；DGGE；枸杞多糖IV佳木斯大学硕士学位论文AbstractObjective：PCR-DGGEseparationofintestinalbacteriausingmolecularbiology16SRNAV3variableregionPCRproductsbyDGGEprofilestripswithanalysis,combinedwithtraditionalmicrobiolo

7、gicalisolation,culture,identificationmethods,ofofwolfberrypolysaccharidesonintestinaldysbiosismodelrolemiceadjusting.Methods：Firstlincomycinhydrochlorideinmice,makingthemouseintestinaldysbiosismodel.SubsequentmodelmiceweredividedintoLiveBifidobacteriumPreparationgroup,natu

8、ralrecoverygroupandLBPgroup,weregiventheappropriatemedication.Allmiceweresacrificedsevend