重组腺相关病毒神经肽y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其海马组织中tau蛋白表达的影响

《重组腺相关病毒神经肽y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其海马组织中tau蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：鸯羽P导师签章：害鸣二级学院领导盖章：夏缸办磐，弓年3月>∥河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除厂文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其

2、他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：莲润p导师签章：地，．；年3月≯，日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4研究论文重组腺相关病毒神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其海马组织中Tau蛋白表达的影响—▲￡．—j一日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17附图⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述Tau蛋白过度磷酸化在癫痫发病机制中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40中文摘要重组腺相关病毒载体神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其

4、海马组织中Tau蛋白表达的影响摘要癫痫(epilepsy)是慢性脑部神经系统疾病，其特征为因脑内一群神经元过度的同步并持续的放电所致的反复性一过性痫样发作(seizure)。癫痫因其难治性及反复发作性，对人们的生活带来极大困扰。颞叶癫痫仍然是其中最常见的药物难治性神经系统疾病。大量研究表明，遗传因素在癫痫的发病机理中占有重要的地位，难治性癫痫亦与多种耐药基因有关，因此癫痫的基因研究是当前国内外癫痫研究的热点。当前国外有关癫痫治疗的研究集中在应用抗癫痫药物治疗，迷走神经刺激和外科手术治疗，虽然从治疗的方法和治疗的效果，较前已取得了一定的进步，但仍有相当一部分难治性癫痫

5、发作不能得到有效控制的现实让国内外专家期待和寻求一种更新的解决办法。基因治疗有希望成为药物难治性癫痫患者的替代治疗。基因治疗是20世纪80年代以后发展起来的一种新的疾病治疗方式，它通过载体将正常基因或有治疗作用的基因导入靶细胞，纠正基因缺陷或合成目的蛋白，从而达到治疗疾病的效果。在用于人类基因治疗的常用病毒载体中，重组腺相关病毒(Recombinantadeno—associatedvirus，rAAV)载体因其无潜在致病威胁，同时能稳定地表达外源基因，宿主范围广，转染率高等优点，得到广泛应用。NPY，即神经肽酪氨酸，是由36个氨基酸组成的一种肽类物质，广泛分布于中

6、枢神经系统及周围神经系统，在中枢神经系统中以海马内浓度最高，具有抗惊厥作用。现已经作为基因治疗癫痫大鼠的重要神经递质。Tau蛋白是一种与微管组装密切相关的含磷糖蛋白。磷酸化Tau蛋白是神经纤维受损形成的产物。本研究通过建立规范的大鼠癫痫模型，应用腺相关病毒基因转染技术，以NPY为治疗基因，以重组腺相关病毒为载体，将NPY基因转染到脑组织特定靶区(本课题组的前期实验已证明rAAV2／1．NPY-EGFP在癫痫病理状态下的脑组织中可以实现有效表达，且脑室注射途径优于海马注中文摘要射途径，故本实验主要采取脑室注射途径)，观察重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2

7、／1一hNP孓EGFP)转染对红藻氨酸(kainicacid，KA)诱导大鼠癫痫发作行为和脑电图的影响，并进一步运用WesternBlotting技术来分析NPY调控癫痫发作后海马组织中磷酸化Tau蛋白的表达变化。目的：探讨重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2／1-hNPY-EGFP)转染对红藻氨酸(kainicacid，KA)诱导大鼠癫痫发作行为、EEG及其海马磷酸化Tau蛋白的影响，以探讨其在癫痫发病机制中的作用以及NPY基因转染对慢性癫痫治疗的可能机制。方法：72只雄性Wistar大鼠，采用随机数字表法，将其随机分成3组(n_24)：对照组、K