间质干细胞受幽门螺杆菌影响对胃上皮细胞作用及机制

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1、分类号＆2三Q!垒3UDC616编号!Q2窆9旦!Q!垒Q!Q江蒜大擎博士学位论文间质干细胞受幽门螺杆菌影响对胃上皮细胞作用及机制MECHANISMANDEFFECTSOFMESENCHYMALSTEMCELLSAFFECTEDBY月：PIZD肼ONGASTRICEPITHELIALCELLS作者姓名指导教师申请学位级别张强许文荣博士学科(专业)临床检验诊断学论文提交日期2013年4月论文答辩日期2013年06月学位授予单位和日期江苏大学答辩委员会主席堂笪鏊评阅人基金资助：国家自然科学基金重大研究计划(

2、91129718)国家自然科学基金(81071421，81201660)江苏省科技创新与成果转化(临床医学专项)(BL2012055)江苏省医学领军人才与创新团队(LJ2011172008-018-02)附件：独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确

3、方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作一：钬弘刁1刃z铜7月f石学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库

4、》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密∥。学位论文作者虢涨础、渺多年铂f名日特挪签Az,积／／％／、々X矿仫指导教师签名：＼，r、W弓年名只f名日江苏大学博士学位论文摘要目的问质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是一类分布广泛且具有多向分化潜能的成体干细胞，能迁移到炎症和损伤组织部位。幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hpylori)是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的重要病因，与胃癌的发生密切相关，Hpylori感染

5、的胃肠道上皮细胞能促进MSCs向胃肠粘膜层募集。因此，MSCs是Hpylori感染所致胃炎微环境中的一种重要成份，然而在Hpylori导致的胃上皮细胞损伤或恶性转化中MSCs究竟起何作用及其机制迄今仍不清楚。因此，本研究旨在探讨Hpylori对MSCs的影响及其对胃上皮细胞的作用及机制，试图阐明MSCs参与Hpylori对胃损伤或胃癌发生、转移及治疗中的作用及机制，为胃癌发生与诊疗提供新的依据。方法体外模拟体内Hpylori(11637)感染过程，采用Hpylori(11637)活菌作为处理因素，与人脐

6、带来源的间质干细胞(humanumbilicalcordMSCs，hucMSCs))以感染指数100：1共培养24h，观察细胞形态变化，收集对照组及实验组的细胞用于后面的实时定量PCR及蛋白免疫印迹检测相关基因，并收集共培养的上清3000转每分钟，离心5min，将上清置一80℃贮存备用。所有实验均在同等条件下重复3次。分别用实时定量RT．PCR、Westernblot方法检测Hpylori作用前后MSCs中癌相关成纤维细胞(cancerassocimedfibroblasts，CAFs)}f[

7、关标志分

8、子(FAP、N．cadherin、Vimentin、12,．SMA等)表达变化情况。采用Luminex及ELISA法检测Hpylori作用hucMSCs后相关细胞因子的分泌情况。用Westernblot法检测Hpylori刺激培养后的hucMSC中NF．1(B水平、NF．KB核转位、磷酸化NF—KB及NF—v．B抑制蛋白boB．13,的表达变化。应用NF—v．B特异性抑制剂PDTC预处理MSCs90min，再用Hpylori刺激培养hucMSCs，观察其是否能干预Hpylori对MSCs的刺激效应。采用

9、MSCs培养上清及Hpylori与MSCs共培养的上清分别与正常胃上皮细胞(GES．1细胞)株共培养48h，观察培养后的细胞形态变化，收集细胞并分别用实时定量RT．PCR和蛋白免疫印迹检测共培养后胃上皮细胞／胃癌细胞中EMT相关标志分子如E—cadherin、N—cadherin、Vimentin等的表达情况。采用Transwell法检测不同上清处理后的GES一1细胞其迁移能力的变化。用手工计数法和MTT法检测正常胃上皮细胞GES．1在不同