雌激素延缓皮肤老化作用机制的初步探讨

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文雌激素延缓皮肤老化作用机制的初步探讨Apreliminarystudyofthemechanismofestrogendelaying●slunaging课题来源：广东省科技计划项目，编号20108031600263(雌激素延缓皮肤衰老的分子机制研究)学位申请人左俊导师姓名李勤教授专业名称外科学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院第一临床学院2013年3月22日广州l㈣删硕士学位论文’一雌激素延缓皮肤老化作用机制的初步探讨硕士研究生：左俊指导老师：李勤教授摘要第一部分雌二醇对皮肤成纤维细胞增殖迁移影响及其调控机制的实验研

2、究目的：观察雌激素(1713．estrogen，1713-E2)对体外培养的正常人皮肤成纤维细胞(Humanskinfibroblast，HSFB)增殖与迁移的影响，探究雌激素调控人皮肤成纤维细胞增殖是否受到丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(mitogen—activatedproteinkinases，MAPKs)的影响，弄清其可能的调控途径及机制。方法：采用酶消化法体外分离培养正常人皮肤成纤维细胞，取第3-6代细胞用于实验；1．采用MTT法，分别于不同浓度1713．E2、1713．E2+雌激素p受体拮抗剂ICI．182780和空白干预后24、48、72、9

3、6h，检测成纤维细胞的分裂增殖活力：2．建立体外细胞划痕(Scratch．Wound)模型，分别于模型制备后24、48h、72h利用倒置相差显微镜观察细胞在不同浓度1713．E2、1713．E2+ICI．182780和空白干预下的迁移情况；3．利用免疫细胞化学技术检测成纤维细胞爬片在17B．E2、17B．E2+ICI．182780和空白干预后TGFl31蛋白表达的变化：4．流式细胞术检测1713．E2及雌激素p受体拮抗剂ICI．182780对成纤维细胞周期分布的影响：5．按干预因素的不同将细胞分为6组：空白对照组(A组)、1713．E2组(B组)、1713-

4、E2+ICI-182780组(C组)、1713-E2+PD98059组(D组)、1713-E2+SP600125组(E组)和1713．E2+SB203580组(F组)，收集经上述各激酶抑制剂和(或)雌激素处理后的成纤维细胞，提取总RNA和总蛋白，分别利用摘要荧光定量PCR和Western．Blot技术检测各组细胞增殖细胞核抗原(Proliferationcellnuclearantigen，PCNA)mRNA和蛋白的表达变化情况。结果：1．(1)MTT检测发现，24h时，各个浓度(10-8_10。12mol／L)雌激素刺激组细胞增殖效应与空白对照组无显著差异

5、(O．118士0．005、O．113+0．007、0．128士0．013、0．113-4-0．006、0．122+0．012vs0．115土0．007)(P>0．05)：48、72、96h时，均以10。10mol／1雌激素组促增殖效应最强(48h，0．208士0．015vs0．121士0．015、0．137土0．017、0．172士0．012、0．137士0．019)；其中72、96h时各浓度组雌激素促增殖效应均显著强于空白组(72h，0．245士0．028、0．303士0．022、0．378士0．041、0．276士0．036、0．232士0．022vsO

6、．166土0．025：96h，0．344士0．036、0．406土0．033、0．485士0．031、0．386土0．032、0．368土0．034vsO．196士0．033)(PO．05)；而48、72、96h时，A组促增殖效应均明显强于另外两组(48h，O．211+0．015vsO．119土0．016、O．136

7、士0．015；72h，0．352士0．049vsO．168士0．030、0．232士0．025：0．486土0．028vs0．196土0．024、0．368士0．034)(P<0．01)；B组细胞在48h时增殖效应与C组无差别(0．136士0．015vsO．119土0．016)(尸>O．05)，但72、96h时均显著强于C组(72h，0．232土0．025vs0．168士0．030；96h，0．368士0．034vs0．196士0．024)(尸<0．01)。2．(1)比较48h时各组细胞迁移效应，以10罐mol／1雌激素组最强(568．4士11．305vs4

8、13．2土25．616、429．4士20．281、5