dcb16融合细胞诱导t细胞特异性ctl的基础实验研究

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1、中图分类号密级DC／B16融合细胞诱导T细胞特异性CTL的基础实验研究TheExperimentalStudyofDC／B16MalignantMelanomaFusionCellsInduceTCell—specificCTL计：学位论文：34页表格：3个插图：10幅王晓飞指导教师：曲巍教授申请学位级别：硕士学位学科(专业)：外科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二。一三年四月答辩委员会主席：附件1：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

2、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：a丛曼k签字日期：止年主月正日附件2：关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应

3、方框内打“4”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：a镌k导师签名：碑砻≤日期：侈年箩月珀日期：炉期矿日2．9融合细胞体外抗肿瘤活性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯123．1形态学观察DC细胞、T淋巴细胞、恶性黑色素瘤细胞和融合细胞⋯·⋯···⋯⋯·⋯·⋯·一”···⋯⋯·一⋯····”····”········⋯··⋯⋯123．2绘制融合细胞生长曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．3DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞刺激自体T细胞增殖实验⋯⋯143．4DC／B16

4、恶性黑色素瘤融合细胞体外诱导T细胞分泌IFN．Y含量测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．5融合细胞体外抗肿瘤活性分析⋯⋯⋯Qoea⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19三、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20四、综述⋯⋯⋯OOOOOOOOO⋯⋯OOOOOOOOO⋯OOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯29五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34大连医科大学硕士学位论文DC／B16融合细胞诱导T细胞特异性CTL的基础实验研究硕士生姓名：指导教师：专业名称：I魔飞曲巍教授外科学摘要目的探讨B16恶性黑色素瘤细胞与C57BL／6小鼠骨髓源树突状细胞融合后体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及对B16恶性黑色素瘤细胞的杀伤作用。方法用聚乙二醇(PEG)将B16恶性黑色素瘤细胞与小鼠骨髓源树突状细胞(DC)融合，融合成功后以DC细胞、B16恶性黑色素瘤细胞做为对照组，DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞作为实验组，绘制融合细胞生长曲线

6、并进行融合细胞刺激自体T淋巴细胞增殖试验。以DC细胞、B16恶性黑色素瘤细胞、DC+B16恶性黑色素瘤细胞联合培养做为对照组，DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞作为实验组，用细胞内细胞素染色法检测DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞诱导CTL的活性，体外检测DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞融合细胞诱导产生的CTL对B16恶性黑色素瘤的杀伤性作用。实验数据用工±S进行计数，使用SPSSl3．0软件，选择one．wayANOVA和LSD’Sposthoctest统计学方法对所得数据进行统计学分析。结果小鼠骨髓源树突状细胞(DC)与B16恶性黑色素瘤细胞成功实现融合

7、，给予合适的完全培养基和生长环境后，发现DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞的生长情况与DC相类似，其增殖能力与B16恶性黑色素瘤细胞相比明显较弱，细胞培养期间没有实现明显的细胞倍增，说明DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞更多了表现出了亲DC的生长增殖特性。以DC细胞、B16恶性黑色素瘤细胞做为对照组，DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞作为实验组，观察其对致敏的T细胞的增殖效率。结果显示，DC／B16恶性黑色素瘤融合细胞可有效刺激同源T淋巴细胞增殖，其促进T细胞增殖能力显著高于单纯DC细胞组和B16细胞组，其统计学比较具有显著性差异(p<0．05)。以DC细胞、

8、B16恶性黑色素瘤细胞、DC+B16恶性黑色素瘤细胞联合培养做为对照组，DC／B