丹参川芎嗪注射液对脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究

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1、分类号：墅丝：!!UDC：616密级：公珏编号：f必§革Dlzj雏l旦￡同力人员硕士学位论文№～STER’SDISSERTATION@论文题目：丹参川芎嗪注射液对脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究学科专业：厶笠鲣剖皇组织胚脸堂作者姓名：盗塑盎指导教师：多小导分类号ljDCR392．11616硕士学位论文密级公珏编号—10299T—0614105_,．丹参川芎嗪注射液对脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究ProtectiveEffectsandMechanismdsofSalviaLigustraz

2、ineInjectionunderCerebralIschemiaandHypoxiaInjury作者姓名：指导教师：小组成员：凌大林卢小东副教授邵启祥教授陈永昌教授狄荣科教授朱海青教授张志坚教授金洁教授申请学位：同等学力申请硕士学位学科专业：入体解剖与组织胚胎学论文答辩R期：2013年6月7R学位授予单位：江苏大学学位授予同期：2013年6月答辩委员会主席：陈永昌独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任

3、何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：褫非日期：≯口l；年{7月厂日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在年解密

4、后适用本授权书。口本学位论文属于口不保密。√学位论文作者签名：≯l弓年b月3同t，夕吞大珠导步．．1J名，捌h配1／iy】】刻，明副彩雏年汐乙江苏大学硕士学位论文摘要目的：通过建立新生大鼠的原代皮层神经元低氧损伤模型，探讨丹参川芎嗪注射液对缺血缺氧条件下对神经细胞的保护作用及其相关机制；利用L．谷氨酸(glutamieacid，Glu)刺激SH．SY5Y神经细胞，模拟脑缺血早期的兴奋性神经毒性损伤，造成神经细胞凋亡的模型，初步分析丹参川芎嗪注射液的保护作用及抗凋亡机制。方法：(1)选用新生Wista

5、r大鼠，分离出双侧大脑皮层，培养原代皮层神经细胞，利用Na2S204与细胞共孵育制备神经细胞低氧损伤模型。分四组进行分析：①正常对照组；②低氧损伤组；③丹参川芎嗪处理组；④川芎嗪处理组；(2)观察各组之间原代皮层神经细胞的一般形态学及凋亡相关形态学的改变；(3)MTT法分析神经元存活率；测定各组神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放●率、活性氧簇ROS水平；荧光倒置显微镜分析线粒体膜电位的变化：(4)测定各组神经细胞Caspase．3的活性，Westernblot分析Bcl，2、Bax的表达水平。(5)利

6、用L．Glu诱导SH—SY5Y细胞的凋亡，观察L．Glu、丹参川芎嗪及川芎嗪对SH．SY5Y细胞的形态学变化；检测各组细胞存活率和神经细胞外液LDH活性；利用RT．PCR检测各组凋亡相关基因Bcl．2幂llBaxmRNA的表达水平。结果：(1)成功培养原代皮层神经细胞，低氧损伤后，神经细胞数量减少，突起明显缩短，细胞核固缩、碎裂，呈现凋亡样改变：丹参川芎嗪注射液较川芎嗪更能明显改善神经细胞损伤和细胞核的凋亡现象；(2)低氧损伤后，神经细胞存活率显著降低，神经细胞LDH释放率明显增加，神经细胞内ROS

7、水平显著增加，线粒体膜电位增高，而丹参川芎嗪较川芎嗪能够更好地提高神经细胞存活率，降低LDH释放率和ROS水平，抑制损伤后线粒体膜电位的增高：江苏大学硕士学位论文(3)低氧损伤后，丹参川芎嗪较川芎嗪能够更明显地抑制Caspase-3的活化，使其活性降低；显著降低Bax蛋白水平，但未改变Bcl．2蛋白的表达，进而降低Bax／Bcl一2比值。改善神经细胞的凋亡状态；(4)丹参川芎嗪注射液较川芎嗪能够更显著地减轻L．Glu导致的神经细胞的形态损伤，提高细胞的存活率，降低细胞LDH活性；(5)丹参川芎嗪注射

8、液和川芎嗪均能明显减少L-GIu引起的神经细胞的凋亡率，显著降低Bax基因的表达，但未明显改变Bcl．2基因的表达，从而降低了Bax／Bd．2比值。结论：在体外，丹参川芎嗪注射液通过抑制低氧损伤的神经细胞内Caspase．3的活化，降低Bax蛋白表达水平，从而降低损伤的细胞内氧自由基水平和胞内LDH的释放率，抑制线粒体膜电位的增高，对缺血低氧损伤的神经细胞起到良好的保护作用；关键词：丹参川芎嗪；川芎嗪：凋亡；L．Glu；神经细胞；SH．SY5Y细胞株Objective