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《大豆两个myb 转录因子基因的克隆及表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、中国农业科学2008,41(4):961-970ScientiaAgriculturaSinica大豆两个MYB转录因子基因的克隆及表达分析1,234122杨文杰，杜海，方芳，杨婉身，吴燕民，唐益雄123（四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014；中国农业科学院生物技术研究所，北京100081；四川农业大学玉米研究所，4四川雅安625014；哈尔滨工业大学（威海）海洋学院，山东威海264209）摘要：【目的】克隆新的植物MYB转录因子基因，进行序列分析，并对其功能进行初步鉴定。【方法】RT-PCR法结合RACE-PCR法分离克隆MYB基因
2、cDNA全长序列；酵母系统检测其转录激活活性；半定量RT-PCR检测目的基因在植物体中的表达情况，及对类黄酮代谢途径中生物合成酶的影响。【结果】根据植物中MYB基因DNA结合域保守区设计简并引物，以大豆品种中豆27的叶片为材料，RT-PCR扩增出两个MYB基因同源片段；据此设计基因特异引物，通过RACE-PCR分离克隆出两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2。酵母系统检测表明，GmMYBZ2具有转录激活功能，β－半乳糖苷酶活性为10.35U；半定量RT-PCR在中豆27的茎和叶中检测到GmMYBZ1的表达，而GmMYBZ2在植物的根、茎、
3、叶及未成熟种子中均有表达；对转基因烟草的RT-PCR检测结果显示，GmMYBZ2的表达可抑制类黄酮代谢途径中PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F4H及FLS等生物合成酶基因的表达。【结论】从大豆栽培品种中豆27中克隆出了两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2；功能研究表明，GmMYBZ2可能参与植物类黄酮合成调控。关键词：大豆；MYB转录因子；基因表达调控CloningandCharacterizationofTwoNewMYBTranscriptionFactorGenesfromSoybean1,234122YANGWen-ji
4、e,DUHai,FANGFang,YANGWan-shen,WUYan-min,TANGYi-xiong12(CollegeofLifeandScience,SichuanAgriculturalUniversity,Ya’an625014,Sichuan;BiotechnologyResearchInstitute,Chinese3AcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081;MaizeResearchInstitute,SichuanAgriculturalUniversity,Ya’an625014,
5、4Sichuan;MarineCollege,HarbinInstituteofTechnologyatWeihai,Weihai264209,Shandong)Abstract:【Objective】GenesencodingnewMYBtranscriptionfactorsweretobeclonedandtheirfunctiontobeclarified.【Method】RT-PCRwasusedtoisolatecDNAsequencesofMYBgenesandtoanalyzetheirexpressioninplants.Thet
6、ranscriptionalactivitiesoftheMYBproteinsweredetectedbyyeastexpressionsystem.【Result】ApairofdegenerateprimersweredesignedaccordingtotheconservedregionswhichencodetheMYBDNAbindingdomainsinplantMYBgenes.Two168bpfragmentswereamplifiedfromtheleavesofsoybeancultivarZhongDou-27usingR
7、T-PCR.TwonewMYBgenes,GmMYBZ1andGmMYBZ2,wereisolatedbyRACE-PCR.ThetranscriptionalactivationabilityofGmMYBZ2proteinwasconfirmedbytheyeastsystemwithβ-galactosidaseactivityof10.39U.Resultsofthesemi-quantitativeRT-PCRanalysisshowedthatGmMYBZ2wasexpressedinroots,stems,leavesandimmat
8、ureseedsofsoybean,whereastheexpressionofGmMYBZ1wasdetectedonl
