基于creb-bdnf信号转导通路研究开心散及其主要成分3,6'-二芥子酰基蔗糖促神经保护和抗抑郁的作用机制

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1、河北北方学院学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。导师签名：研究生签名：扫l固回问研究生学位论文独创性声明矽7弓年玉月弓汨本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名：棚研究生签名：争II；l司；；习w7弓年岁月劢日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．j⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9研究论文基于CREB．BDNF信号转导通路研究开心散及其主要成分3,6’．二芥子酰基蔗糖促神经保护和抗抑郁的作用机制前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lU材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32附表⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58综述CREB与抑郁症治疗关系的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72中文摘要基于CREB．BDNF信号转导通路研究开心散及其主要成分3,6’-二芥子酰基蔗糖促神经保护和抗抑郁的作用机制摘要开心散是唐宋以来中医传统益气养心、安神定志的代表方和

4、基本方，为多家重要方书所收载，它由远志、人参、茯苓和石菖蒲四味药组成。本课题组前期针对开心散在治疗中医情志病(主要以抗抑郁和增强学习记忆能力)的作用和机制方面进行了大量的研究工作。在多个经典的抗抑郁模型上开心散都表现出了明显的抗抑郁作用，本次研究前期再次验证了开心散在绝望模型上的抗抑郁作用和对小鼠海马中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbingdingpretein，CREB)相关蛋白的影响，更为有意义的是进一步发现了开心散提高脑内5一羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)与脑源性神经营养因子(Brain—

5、DerivedNeurotrophicFactor，BDNF)的相关性，为开心散调控5-HT-CREB—BDNF神经通路的研究给予了有力的铺垫。鉴于开心散成分的复杂性，前期课题组力图筛选发现开心散中参与5-HT-CREB．BDNF通路抗抑郁的活性成分，研究发现0，6’一二芥子酰基蔗糖(3,6’disinapoylsucrose，DISS)在众多成分中脱颖而出，具有明显的抗抑郁作用，可改善抑郁小鼠行为学指标，增强5-HT系统功能，对慢性应激大鼠下丘脑．垂体．1肾上腺轴(hypothalamic—pituitary．adrenalcortexaxis，HPA)激

6、素水平具有调节作用，增加抑郁动物海马中磷酸化CREB表达，并能提高CREB下游靶基因BDNF的mRNA及蛋白的表达。为进一步研究DISS通过神经保护作用发挥抗抑郁的细胞分子机制，特别是参与5．HT-CREB．BDNF生物通路的具体靶点，本实验以该通路关键靶点CREB及其下游相关营养因子BDNF为核心，采用CREB上游相关通路拮抗剂，围绕DISS参与启动CREB磷酸化通路，促神经保护作用进行了初步的分析和研究。1开心散对小鼠抑郁行为和海马中脑源性神经营养因子的影响将小鼠随机分为空白对照组、盐酸氟西汀组、开心散不同剂量组，中文摘要连续灌胃7天，末次给药1h后进行

7、小鼠悬尾实验，高效液相色谱法测定小鼠全脑中去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)、5-HT的含量，蛋白印迹法检测小鼠海马中CREB，P．CREB，BDNF的蛋白含量，RT-PCR法测定小鼠海马中BDNFmRNA的含量，结果发现开心散可明显缩短小鼠悬尾不动时间，增加脑内单胺类递质(DA和5-HT)和海马中CREB、P．CREB、BDNF的含量，并发现开心散抗抑郁作用与海马中BDNF水平呈良好相关性。2DISS对SH-SY5Y细胞增殖及CREB活化的影响体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH．SY5Y)，基于本室细胞特性，

8、用CCK一8法测定不同密度细胞的生长曲线，筛选最佳种