蹄叶橐吾叶多糖的提取及其体外生物学活性研究

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1、分类号：TS201.1单位代码：10190研究生学号：201310043密级：无硕士学位论文蹄叶橐吾叶多糖的提取及其体外生物学活性研究ExtractionofPolysaccharidesfromLigulariaFischeriLeavesandDevelopmentsonBiologicalActivityinVitro研究生姓名：尤婷婷专业：食品科学与工程指导教师姓名：姜燕指导教师职称：讲师2016年4月万方数据硕士学位论文万方数据硕士学位论文摘要近几年，我国空气雾霾情况逐年加剧，人们日渐重视对咽喉、肺部的保健，提高了对加强自身

2、免疫力的意识。蹄叶橐吾的根及根茎在吉林省药材标准中记载为山紫莞，主“温肺下气，消痰止嗽”，它的叶片具有特殊风味，是延吉人民喜食的一种野菜，有研究表明蹄叶橐吾叶片提取物具有消炎和提高免疫力等功效，目前主要集中为有机溶剂提取物，本文以水提物为研究对象，提取、精制并分级蹄叶橐吾叶多糖（PLF），最后从抗氧化能力及对细胞存活率的影响两方面初步探讨其生物学活性。主要研究了以下几方面内容。研究了PLF的提取及精制工艺。首先，对叶片定性检出酚类、多糖类、黄酮类、生物碱等活性成分；水提醇沉提取PLF，采用响应面试验优化PLF最佳提取工艺为料液比1:2

3、0（g/mL）条件下，在90℃水浴锅中提取2h，收集滤液3次，PLF提取率为8.76%；壳聚糖絮凝纯化PLF得到精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF），采用正交试验优化最优精制工艺为在50mLPLF（浓度为2mg/mL）中加入壳聚糖（浓度为2%）1mL，30℃条件下搅拌，絮凝60min后蛋白质去除率为85.03%，脱色率为81.74%，多糖损失率为42.81%；通过定性实验、紫外全波长扫描（UV-Vis）、红外光谱扫描（FTIR）和高效液相色谱（HPLC）等技术确定DPLF的理化性质，初步判断其除杂程度，特征基团及单糖组成成分。采用离子交换层

4、析柱梯度洗脱DPLF，结合琼脂糖凝胶柱层析进一步分级，最终得到DPLFN，DPLFA1-1，DPLFA1-2，DPLFA2-1，DPLFA3-1，DPLFA3-2，DPLFA4-1和DPLFA5-1八个组分。通过UV-Vis、FTIR、HPLC和高效凝胶渗透色谱（HPGPC）确定了其中五种组分几乎不含干扰类杂质；推测出可能含有的特征基团；明确了单糖组成成分，其中主要包含的单糖种类有：甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等；计算出该四种组分相对分子量（Mw）依次为4.0992×105，1.3016×106，3.4

5、410×104和1.0280×104。研究了DPLF的生物学活性。（1）DPLF的抗氧化活性：从总抗氧化能力、还原力和对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力五方面综合评价，结果表明DPLF具有一定的抗氧化能力，尤其对DPPH自由基清除能力较强，半抑制浓度为0.0351mg/mL；（2）采用MTT比色法测定DPLF对ConA诱导的小鼠脾细胞存活率的影响：当浓度为2μg/L时，影响显著，细胞存活率为100.3135%，此时ConA刺激细胞增殖指数为1.7606。关键词：蹄叶橐吾叶多糖絮凝纯化抗氧化能力细胞存活率I万方数据

6、硕士学位论文AbstractTheairofhazeinChinaisincreasedrecentyears.Peopleincreasinglypaymuchattentiontothethroatandlungcareandimprovingtostrengthentheirownimmunity.TherootandrhizomeofLigulariafischeriwererecordedas“ShanZiYuan”inJilinprovincemedicinalstandard,itseffectis“Warmlung,l

7、owingthebreath,eliminatingphlegmsyndromes”.LigulariafischerileaveswithspecialflavorisakindofediblewildherbspopularlyinYanJi.StudieshaveshownthatLigulariafischerileafextractshaveanti-inflammatoryandenhanceimmunity,etc,mostofwhichwereorganicsolventextracts.Inthispaper,aqu

8、eousextractastheresearchobject,extracted,purifiedandgradedtheLigulariafischerileafpolysaccharide(PLF).Twobiolo