mir-224及mir-378e在大肠癌组织中的表达及其临床意义

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。·=．，‘：j．：：冀一＼、．黟。一!誉麓研究生签名瑭脚缈导师签章：＆乒》二级糕签擎蠢嚣≥＼年砖月》7曰＼_．0：研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名孛移别形翩肄≮箩二日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文miR-224及miR-378e在大肠癌组织中的表达及其临床意义前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10一丹!J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31综述大肠癌相关microRNA研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44中文摘要miR-224及miR-378e在大肠癌组织中的表达及其临床意义摘要目的大肠癌包括结、直肠癌，是常见的严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一，其发病机制还没有完全明确，癌基因激活与抑癌基因失活、信号通路改变、细胞微卫星不稳定性、基因多态性都可能诱导其发生。既往的研究表明，微小RNA(microRNA，miRNA)在多种肿瘤的发生、演进、侵袭、转移和血管生成中起到了重要作用，包括大肠癌。本研究利用基因芯片技术对比分析大肠癌患者癌组织与癌旁正常黏膜组织中miR-224和miR-378e表达的差异

5、，应用实时荧光定量PCR验证，并通过分析其与临床病理资料之间的关系，以期筛选到大肠癌特征性的m枞及治疗靶分子，为进一步研究miR-224和miR-378e在大肠癌中生物学功能及相关下游靶标基因奠定基础。方法1收集河北医科大学第一医院及河北唐山工人医院2011年5月～2012年5月大肠癌住院行大肠癌根治术手术病人标本44例。所有病人术前均未行放、化疗及免疫治疗。收集病人的性别、年龄、Dukes分期、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结状态、浸润深度、分化程度等临床病理资料。全部患者44例均行u6、miRNA．224、miRNA．378e检测，其中男性2

6、9人，女性15人。年龄29--一，83岁，中位年龄65岁。实验分组按标本取材分为大肠癌组、癌旁正常黏膜组织组。2TrizoL法提取大肠癌组织及癌旁正常组织中总RNA。选取3例大肠癌组织及配对的正常黏膜组织RNA送美国LCSciences公司进行miRNA表达芯片分析，初步筛选有表达差异的miRNAs。反转录按照美国fermentas公司反转录试剂盒说明书操作；ReaL．timeqPCR检测大肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miRNA．224、miR-378e的表达，引物购自广州锐博公司，按说明书操作。反应条件：95℃预变性10min，然后按95℃

7、×10S，60℃×30S，72℃×10S，进行45个循环，重复3次取平均值。本研究采用2“妃1。法，其中△CT为CT靶基因与CTU6的差值，△△CT为△CT癌组织与△CT正常组织的差值。中文摘要3实验数据处理：采用SPSS13．0统计软件进行分析，偏态分布资料以M(P25，P75)表示，采用非参数检验MannWhitney分析，P<0．05为差异有统计学意义。结果1miR-224在大肠癌组织中的表达及临床意义(表1)1．1基因芯片结果显示miR-224在癌组织中的信号强度为170，而正常黏膜组织中仅为29，经对数标准化后miR-224在癌组织

8、中表达上调2．52倍。在临床样本中验证结果显示，miR-224在44例患者癌组织、正常黏膜组织中表达量分别为3．949X10。5(1．495×10一，9．594X1