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《绿色荧光蛋白标记穿梭表达载体构建及重组乳酸菌制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、吉林农业大学学报2009,31(3):325～329http://xuebao1jlau1edu1cnJournalofJilinAgriculturalUniversityE2mail:jlndxb@vip1sina1com绿色荧光蛋白标记穿梭表达载体构建及重组乳X酸菌制备XX陈晓雷,杨桂连,王春凤吉林农业大学动物科技学院,长春130118摘要:以红霉素耐药性基因/thyA基因双筛选压力大肠杆菌—乳酸杆菌穿梭表达载体pW425et为基本骨架,将绿色荧光蛋白(GFP)基因插入该载体,构建GFP标记的穿梭表达载体pW425
2、et2GFP。通过连续的荧光强度检测,验证gfp基因能否在重组菌中得到稳定表达。重组表达质粒pW425et2GFP酶切和PCR鉴定结果与预期片段大小相符,SDS-PAGE显示27kD的绿色荧光蛋白获得表达,在蓝光的激发下,可见明显的绿色荧光,且荧光稳定性强,连续传代30次仍可见荧光。结果表明已成功构建了GFP标记穿梭表达载体pW425et2GFP,为乳酸菌作为益生生理菌载体进行体内定植规律研究和食品级、疫苗级乳酸菌产品的开发奠定了基础。关键词:绿色荧光蛋白;穿梭表达载体;大肠杆菌;乳酸菌中图分类号:S85216文献标识码
3、:A文章编号:100025684(2009)0320325205ConstructionofGFPLabelingShuttleExpressionVectorandPrepara2tionofRestitutionLactobacillusCHENXiao2lei,YANGGui2lian,WANGChun2fengCollegeofAnimalScienceandTechnology,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,ChinaAbstract:GFPlabeli
4、ngshuttleexpressionvectorpW425et2GFPwasconstructedbyinsertinggreenfluo2rescentprotein(GFP)basedonerythromycindrugresistancegene/thyAgenedipl2boltingpressureshuttleexpressionvectorpW425et1TheexpressionstabilityofGFPwasestimatedbyconsecutivefluorescencein2tensityde
5、tection1ResultsofenzymedigestedandPCRidentifyofpW425et2GFPwereconsistentwiththoseexpected1SDS-PAGEshowedthat27kDGFPhadbeenexpressed1Greenfluorescentwhichcouldbeobservedinthebluelightwereofhigherstabilityafter30serialpassages1ResultsshowedthatGFPla2belingshuttleex
6、pressionvectorhasbeenconstructedsuccessfully1Itestablishesthefoundationforthere2searchoffieldplantingaxiominvivoaswellasthedevelopmentofthefood2gradeandthevaccine2gradelacticacidbacteriaproductionoflactobacillusasaphysio2bacteriumvector1Keywords:greenfluorescentp
7、rotein;shuttleexpressionvector;E1coli;Lactobacillus大肠杆菌表达系统是目前研究广泛、遗传背全性和益生功能逐渐成为一种新型原核表达受体景较清楚的表达系统。该系统的基因遗传操作简菌而被研究者广泛关注,像分离自人类肠道的植便、方法成熟,质粒载体在该系统中也可获得理想物乳杆菌NCIMB8826已经成为研究口服疫苗载[1][2]的拷贝数。近年来,益生乳酸菌以其特有的安体的模式菌株。益生乳酸菌作为一种肠道正常X基金项目:国家自然科学基金项目(30671573),国家高技术研究发展计划
8、项目(2006AA10A205,2007AA10Z322)作者简介:陈晓雷,男,硕士研究生,主要从事动物微生物与生物技术研究。收稿日期:2008209204修回日期:2008211204XX通讯作者326吉林农业大学学报2009年6月生理菌能够在肠道内定植,维持肠道菌群平衡,能下游引物的5′端引入SacⅡ酶切位点。够
