苦参碱通过bid诱导aif入核引起肝癌细胞凋亡的机制

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1、厦门大学学位论文原创性声明本人呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考其他个人或集体己经发表的研究成果，均在文中以适当方式明确标明，并符合法律规范和《厦门大学研究衅黧篡≥勰啪椭一另外，该学位论文为(才滔礅1中I√欷豫)课题(组)的研究成果，获得(胡夭鞍)课题(组)经费或实验室的资助，在(嘲戈瓢)实验室完成。(请在以上括号内填写课题或课题组负责人或实验室名称，未有此项声明内容的，声明人(签名)：同欢2DJ弓年6月r日厦门大学学位论文著作权使用声明／㈣本人同意厦门大学根据《中华人民共和

2、国学位条例暂行实施办法》等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。本学位论文属于：()1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文，于年月日解密，解密后适用上述授权。(√)2．不保密，适用上述授权。(请在以上相应括号内打“√"或填上相应内容。保密学位论文应是已经厦门

3、大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声明人(签名)：同欢劫B年易月j日摘要肝癌是一种常见的恶性肿瘤，它严重威胁着人类的健康。然而，由于肝癌本身所具有的生物学特性，使其成为目前尚缺乏有效治疗手段的疾病。苦参碱是从我国传统中药苦参的干燥根中提取出的一种生物碱活性成分，分子式为C15H24N20，具有广泛的药理学作用。近年来的研究表明，苦参碱能在体内、外对多种肿瘤细胞起作用，诱导肿瘤细胞凋亡。然而，苦参碱诱导肿瘤细胞

4、凋亡的作用机制还不明确。本论文以人肝癌细胞系HepG2及裸鼠荷肝癌模型为研究对象，探讨苦参碱的抗肿瘤作用及原理。通过MTT法、PI染色法、流式细胞术，阐明了苦参碱对肝癌的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用；使用WestemBlot、免疫荧光和免疫组化等方法全面探索了苦参碱诱导肝癌细胞凋亡可能的分子机制。论文研究表明，苦参碱在体外可抑制HepG2细胞的增殖作用和诱导凋亡，呈时间和剂量依赖性，将细胞周期阻滞在G0／G1期。同时研究发现，苦参碱可诱导Fas、Fas．L表达上调，Bid、Bcl一2表达下调，Bax表达上调和C

5、aspase通路激活，这些结果表明苦参碱在体外是依赖于多条凋亡通路来诱导人肝癌细胞发生凋亡。苦参碱还能引起线粒体膜电位崩溃，ROS活性增高，核Bid转位到细胞质，部分Bid还可以转位到线粒体，AIF从线粒体转位至细胞核。但不论是苦参碱诱导ROS的产生受抑制，还是Bid／AIF的表达受抑制，都可阻止苦参碱诱导的细胞凋亡。同时，Tiron抑制ROS产生后，还可阻止由苦参碱诱导的AIF核转位作用。此外，采用Bid抑制剂BI．6C9和siRNA静默技术下调Bid蛋白表达，都可阻止AIF由线粒体转位至核内，提示苦参碱可通过B

6、id调控AIF入核诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。最后，建立裸鼠皮下成瘤模型，证实有效剂量的苦参碱可以在裸鼠体内抑制HepG2细胞的增殖生长，并同步观察到Bid表达水平下调和AIF转位入核。通过这些研究，较为详细地阐明了苦参碱在体内外对人肝癌细胞存活增殖的抑制作用与机制，为其作为基于Bid／AIF分子靶点的抗肝癌药物开发奠定理论基础，也为苦参碱在癌症治疗的临床应用提供科学的实验依据。关键词：肝癌；苦参碱；Bid／AIF；凋亡AbstractHepatocellularcarcinoma(HCC)isoneofthec

7、ommonmalignanttumors，anditisaseriousthreattohumanhealth．However,ithasnotbeeneffectivelytreatedSOfarbecauseofitsbiologicalcharacteristics．MatrineisoneofthemainalkaloidcomponentsextractedfromtheSophoraroot，withamolecularformulaofCIsH24N20．Matrinehasbeenwidelyuse

8、dinChina，becauseofithasawiderangeofpharmacologicaleffects，suchasanti—inflammatory,antiviral，immunoinhibitory,antifibrotic，analgesic，antiarrhythmicandanti—diarrheaeffects．Recently,i