预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响EffectsofFructusAkebiaeextractsonthelevelofmonoamineneurotransmitterinratbrain课题来源：国家自然科学基金项目：预知子抗抑郁活性的物质基础与作用机制研究(No．30772713)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员薛天杨雪梅药物化学学术型硕士研究生药学院雷林生袁牧鄢明佘志刚陈文华2013年4月3目广州IIIIIII

2、IIllUlIIIIIIIIIIIIlY2406511硕士学位论文预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响硕士研究生：薛天指导教师：杨雪梅副教授摘要目的建立准确、灵敏、操作简便的高效液相色谱一电化学检测法(HPLC．ECD)，测定大鼠脑组织中单胺类神经递质含量；考察预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5．HT)含量的影响，探索FAE可能的抗抑郁机制。建立检测马兜铃酸A的高效液相色谱法(HPLC-DAD)，检测FAE与常春藤皂苷元(Heder

3、agenin)中，是否含有肾毒性残留成分马兜铃酸A，进一步完善质量控制标准，以确保FAE和常春藤皂苷元的用药安全性。方法1、大鼠脑组织中单胺类神经递质测定方法的建立：采用HPLC．ECD法测定大鼠脑组织中NA、DA、5．HT的递质含量，以3，4．二羟基苄胺(DHBA)为内标。采用的色谱条件为，色谱柱：DikmaDiamonsil．C18(5lam，4．6x250mm)；流动相：A．B(90：10)，A为磷酸二氢钠水溶液(含25．0mmol／LNail2P04，1．7mmol／L辛烷磺酸钠，O．7mmol／L三乙胺

4、，0．025mmol／LEDTA．2Na，pH=3．0)，B为乙腈；流速：1．0mL／min；柱温：32℃；检测电势：E1=．150V，E2=220V，进样量20“L。中文摘要2、FAE对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响：(1)急性给药实验：将体重范围在200．220g的雄性SD大鼠，随机分为4组，即溶剂对照(0．5％羧甲基纤维素钠)组、草酸．S．西酞普兰(ESC)10mg／kg阳性对照组、FAE50mg／kg给药组和FAE25mg／kg给药组。各组动物均灌胃一次，灌胃体积为10mL／kg；大鼠单次给药后分别

5、于1h、2h、3h、5h四个时间点取出脑组织，冰上操作分离不同脑区，收集样品待测。(2)亚急性给药实验：将体重范围在200．220g的雄性SD大鼠，随机分为4组(同急性给药实验)，除溶剂对照组灌胃给予O．5％羧甲基纤维素钠外，其余各组灌胃给予相应药物处理；各组动物每日灌胃1次，每次灌胃体积为10mL／kg，连续给药21d，并于末次给药2h后收集样品。(3)样品处理：大鼠断头处死，迅速取出全脑，于冰上快速分离出前额皮层、海马、纹状体部位，置冻存管存于液氮。取冻存的脑组织，称重后置于玻璃匀浆器，按10mL／kg的比例

6、加入预冷含内标DHBA的高氯酸工作液，于冰浴下快速匀浆2min。将研磨好的匀浆液移入棕色离，tl,管，于4℃条件下14000xg离一Ii,20min后取上清液，上清液再用0．22gm滤器过滤后上机检测。(4)数据处理：各部位的单胺类神经递质含量，均换算成湿组织浓度(ng／g)，并用SPSSl3．0进行统计学分析(ONE．WAYANOVA)，结果用GraphPadPrism5作图。3、马兜铃酸A检测方法的建立：采用HPLC．DAD法，样品用DikmaDiamonsil．C18柱(5gm，4．6x250mm)进行分离

7、；以乙腈一水一冰醋酸(80：20：0．04)作为流动相；流速1．0mL／min，柱温为32℃，进样量为20¨L；检测波长分别为210nm与250nm。结果1、测定大鼠脑组织中单胺类神经递质的HPLC．ECD法：样品中的内源性物质不干扰检测，各色谱峰均有效分离。NA、DA、5．HT的定量下限依次为12．0ng／mL、9．8ng／mL、20．8ng／mL，分别在0．0240-0．2400，0．0196-0．1960，0．0226-0．2260J，tg／mL范围内线性关系良好(R2之O．9996)；平均回收率分别为NA

8、：84．41‰102．77％，DA：87．52％～104．61％，5-HT：lT硕士学位论文83．74％101．66％，RSD均小于15％；日内精密度均在3．05％5．81％范围内，日间精密度在4．98％～7．59％之间。2、急性给药处理后，大鼠脑组织各部位的单胺类神经递质变化结果：(1)在前额皮层与海马部位，与溶剂对照组比较，NA在急性给予25mg／kg和50mg／kg