表达鸡毒支原体tm1蛋白基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究new

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1、第35卷第10期中国预防兽医学报Vol.35，No.102013年10月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineOct.2013doi:10.3969/j.issn.1008-0589.2013.10.01表达鸡毒支原体TM1蛋白基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究121121*1*冯秋霖，刘茂军，祁芳，陈曦，邵国青，葛金英，步志高(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京210095)摘要：为研制安全、有效的新型

2、鸡毒支原体(MG)疫苗，本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统，构建出表达MGTM1蛋白的重组病毒rLa-TM1，并对其生物学特性进行鉴定，评估其作为MG活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光试验表明TM1蛋白获得正确表达；经测定，重组病毒平均鸡胚致死时间(MDT)为132h，脑内致死指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)均为0，保持了LaSota亲本株的低致病9.5性；rLa-TM1接种鸡胚所收集尿囊液中的病毒滴度可高达每毫升10EID50以上，证明重组病毒保持了LaSota亲本株高滴度鸡胚生长特性；重组病毒rLa-TM1接种1周龄的雏鸡后，可以

3、诱导显著的MG抗体反应；攻毒保护试验证明其保护率可以达90%，而对照组全部发病(10/10)。本研究表明重组病毒rLa-TM1可以作为MG重组病毒活载体疫苗的候选疫苗。关键词：鸡毒支原体；反向遗传操作系统；重组新城疫病毒中图分类号：S852.62文献标识码：A文章编号：1008-0589(2013)10-0779-04ConstructionofrecombinantNewcastlediseasevirusexpressingTM1geneofMycoplasmagallisepticumanditsimmuneresponseinchickens121121*1*FENGQiu-l

4、in,LIUMao-jun,QIFang,CHENXi,SHAOGuo-qing,GEJin-ying,BUZhi-gao(1.StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology,HarbinVeterinaryResearchinstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China;2.VeterinaryResearchInstitute,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,Nanjing210095,China)Abstract:In

5、ordertodevelopasafeandefficientrecombinantMycoplasmagallisepticum(MG)vaccinebasedonNewcastlediseasevirus(NDV)LaSotavaccinestrainasviralvector,weconstructedandrescuedarecombinantNDV(rLa-TM1)whichexpressedTM1proteinofMGbyreversegenetictechniques.TheexpressionofMGTM1proteinfromrecombinantviruswasco

6、nfirmedintheinfectedBHKcellsbyindirectimmunofluorescenceassay.PathogenictestshownthattherLa-TM1retainedNDVhigh-titergrowthpropertyandlowpathogenicityinembryonatedchickeneggs.Moreover,therLa-TM1inducedhightiterofantibodyagainstMGinoneweekpostvaccinationinchickenswhichprovidedupto90%ofprotectionag

7、ainstMGchallenge.TheseresultsdemonstratedthattherLa-TM1hadthepotentialofbeingusedasanovelMGvaccine.Keywords:Mycoplasmagallisepticum;reversegeneticsystem;recombinantNDV*Correspondingauthor收稿日期：2012-08-14基金项目：国家自然科学基金(30800816