丁草胺荧光偏振免疫分析——示踪物的合成与鉴定

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1、中罔农业科学2008，41(11)：365l-3655ScientiaAgriculturaSinicadoi：10．3864~．issn．0578—1752．2008．11．027——丁草胺荧光偏振免疫分析示踪物的合成与鉴定薛钢，雷红涛，沈玉栋，刘细霞，吴青，孙远明，王弘(华南祀I大学食质量安全研究所／广东省食品质量安全重点实验室，广州510642)摘要：【目的】为建立除草剂丁草胺的荧光偏振免疫检测方法，对关键试剂示踪物进行合成与鉴定。[3-法】以异硫氰酸荧光素、乙二胺和己二胺为原料，合成了异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)和异硫氰酸荧光素己二胺(HD

2、F)两种中间体，薄层层析法分离出目标产物，电喷雾电离质谱法鉴定；然后将5一氨基荧光素(AF)、EDF、HDF分别与丁草胺半抗原(BMPA)连接，得到3种不同间隔臂的示踪物(BMPA—AF，BMPA—EDF和BMPA—HDF)，利用抗血清稀释曲线测定抗血清效价，竞争抑制曲线测定不同示踪物检测灵敏度。【结果】3种示踪物合成成功，抗血清稀释曲线和竞争抑制曲线显示3种示踪物的抗血清效价分别为1／600、1／1500和31600，半抑制浓度分别为1292、433和298ng．ml～。【结论】合成出3种不同间隔臂的丁草胺示踪物，对示踪物的性质进行初步研究，为下一

3、步建立丁草胺荧光偏振免疫分析方法奠定了基础。关键词：丁草胺；荧光偏振免疫分析；示踪物；异硫氰酸荧光素DevelopmentofFluorescencePolarizationImmunoassayfortheHerbicideButachlorSynthesisandIdentificationofTracersXUEGang，LEIHong—tao，SHENYu—dong，LIUXi—xia，WUQing，SUNYuan-ming，WANGHong(InstituteofFoodQualityandSafety,SouthChinaAgricult

4、uralUniversity／GuangdongKeyLabofFoodQualityandSafety,Guangzhou510642)Abstract：[Objective]Toestablishfluorescencepolarizationimmunoassaymethod(FPIA)fortheherbicidebutachlor,thekeyreagent(tracer)wassynthesizedandidentified．【Method】Usingfluoresceinisothiocyanate(FITC)，ethylenediam

5、ineandhexylenediamineasmaterials，fluoresceinthiocarbamylethylenediamine(EDF)andfluoresceinthiocarbamylhexylenediamine(HDF)wereobtained，whichwerepurifiedbythinlayerchromatographyandidentifiedbyESI—MS．Varioustracers(BMPA—AF，BMPA—EDFandBMPA—HDF)withdiferentlengthesofbridgebetweent

6、hehaptenmoleculeand5-Aminofluorescein(AF)，EDF，HDF，weresynthesizedtoachievehigh—sensitivityFPIA．ThetitersofantiserumandthesensitivityofvarioustracerswereestimatedbydilutioncurvesandcalibrationCurves，respectively．【Result]ThreefacersweresynthesizedSuccessfully,thetitersofantiserum

7、ofthreetracerswere1／600，1／1500andl／600、andtheIC50SofbutachlorFPIAofthreetracerswere1292．433and298ng-ml～．【Conclusion1ThealTnlengthoftracersafectsefectthecharactersofFP1A．thetracerwithlongerarmismoresensitivetobutachlorFPIAthanonewithshorterarm．ThisresearchiSofbenefittofurtheropt

8、imizationofFPIA．Keywords：Butachlor；Fluorescencepolariz