阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢=艺思。学位论文作者签名：]驯蕾厶步签字日期：2口1净否月乙日遵义医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被

2、查阅和借阅。本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名：飞兮包J，L签字日期：沙1、年占月21日嚣翥：军㈣日论文：阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7前言⋯⋯一一⋯⋯“⋯一一

3、⋯一“⋯一“⋯”一⋯⋯⋯一“⋯一”一·9刖舌⋯⋯一一⋯⋯“⋯一‘“⋯一⋯⋯“⋯”‘⋯⋯⋯⋯“⋯一”一’第一部分：离体心脏缺血一再灌注模型构建及心肌线粒体样本的制备材料一⋯一一⋯”一⋯””一”⋯“一⋯⋯⋯”⋯“．．⋯””⋯．．⋯”11方法”⋯一一”一“”一“一⋯．．”“⋯⋯．．⋯··⋯⋯·⋯⋯·⋯·⋯“·12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯一“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论”⋯．．”“一⋯⋯⋯一“⋯·⋯⋯⋯⋯“·⋯····⋯·⋯··⋯⋯··2l第二部分：心肌线粒体蛋白双向电泳、质谱鉴定及回复验证材料⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯·⋯⋯··⋯····⋯⋯⋯⋯⋯⋯······23方法”．．

4、⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯··一·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32结果”⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯····40讨论”．．⋯““一““⋯一””．．⋯”⋯”一”⋯“⋯一“⋯⋯⋯．．一一482结论··⋯⋯·⋯⋯·⋯⋯·········⋯⋯···············⋯⋯·⋯⋯····54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55综述：ATP敏感性钾通道在心肌保护中的研究进展⋯⋯⋯59致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯69作者简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯703英汉缩略词对照表4阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体七匕较蛋白质组学的

5、研究中文摘要目的：通过研究5一羟葵酸阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体蛋白质的表达变化，寻找心肌缺血再灌注损伤的标识蛋白和保护蛋白，为科研和临床提供依据。方法：1．建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型：雄性SD大鼠(N=24)随机分为正常组(Nor)、缺血再灌注损伤组(I／R)、缺血后处理组(IPO)、5一羟葵酸阻断缺血后处理组(5．HD+IPO)，每组6只；各组灌注方案：Nor组：持续灌注Kerbs．Henseleit缓冲液(K-H液)120min。I瓜、IPO及5-HD+IPO组于缺血前灌注K．H液平衡20min，灌注4℃St．Thomas停跳液缺血

6、40min，而后分别按以下方案续灌：I瓜组：灌注K-H液60rain；IPO组：复灌前给予K．H液复灌10S、停灌10s循环6次，继而K．H液58min；5-HD+IPO组：复灌前依次灌注100lamol／L5．羟葵酸3min、K-H液复灌10S停灌10s循环6次、K．H液55min。记录各组平衡末和续灌末心率(胍)、左室发展压(L、rDP)、左室舒张末压(LVDEP)以及最大dp／dt等心功能的变化，并收集心室肌组织；2．差速离心联合Nycodenz密度梯度离心获取大鼠心肌线粒体，通过透射电镜检测线粒体的纯度、完整性和富集度；3．对IPO与5-HD+IPO组心肌线粒

7、体蛋白行双向凝胶电泳(2．DE)，扫描获取数字化图像，采用PD—Quest8．0软件查找差异表达蛋白点，并将蛋白点挖取进行质谱分析后获得蛋白相关信息：4．利用Westernblot回复验证关键差异蛋白的表达趋势，以判断2-DE结果的可靠性。结果：1．透射电镜证实Nyeodenz不连续密度梯度离心法使线粒体的纯度进一步提高；2．各组心功能指标在平衡末无明显差异，灌注末Nor组及IPO组的心功能明显好于I／R组和5-HD+IPO组(尸