不同脊髓节段重复磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能及GAP-43表达的影响

不同脊髓节段重复磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能及GAP-43表达的影响

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1、成都中医药大学(养生康复学院)二0一八届硕士研究生学位论文不同脊髓节段重复磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能及GAP-43表达的影响TheeffectsofrepetitivemagneticstimulationactondifferentsegmentsofthespinalcordonmovementfunctionandexpressionofGAP-43inratsafteracutespinalcordinjury研究生姓名:刘浩指导教师:张安仁教授学科专业:康复医学与理疗学二○一八年五月学位论文不同脊髓节段重复

2、磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能及GAP-43表达的影响TheeffectsofrepetitivemagneticstimulationactondifferentsegmentsofthespinalcordonmovementfunctionandexpressionofGAP-43inratsafteracutespinalcordinjury刘浩指导教师姓名:张安仁教授申请学位级别:硕士专业名称:康复医学与理疗学论文提交时间:2018年4月论文答辩时间:2018年5月二○一八年五月成都中医药大学硕士学位论文中文摘

3、要目的:采用钳夹型急性T10脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)大鼠模型,对其不同脊髓节段进行重复磁刺激(magneticstimulation,MS)治疗,通过为期8周的行为学评估、组织形态学观察和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达水平检测,探索重复经脊髓磁刺激(repetitivetrans-spinalmagneticstimulation,rTSMS)作用于不同脊髓节段对急性脊髓损伤(acutespinalcordinjury,ASCI)大鼠运动功能及GAP-43表达的影响,初步探寻rTSMS的

4、最佳刺激部位,为rTSMS在SCI中的临床应用提供理论支撑和实验证据。方法:从80只SD大鼠中随机选择16只作为E组:假手术组(仅暴露脊髓),其余64只大鼠采用医用临时脑动脉瘤夹(标定力70g)建立T10钳夹型脊髓损伤大鼠模型,然后随机分为A组:T6节段刺激组、B组:T10节段刺激组、C组:L2节段刺激组、D组:对照组,每组16只。A、B、C三组从术后第4天开始分别在相应脊髓节段给予5Hz、75%最大输出强度(1.5T)的磁刺激,每序列5s,间歇2s,连续10个序列,1次/d,每周5d,连续治疗8w。各组大鼠在术前1d及术

5、后1d、1w、2w、4w、6w、8w进行行为学BBB评分;8w后以损伤节段为中心截取长约1cm的脊髓组织,通过透射电镜观察损伤节段脊髓组织超微结构变化情况,免疫组织化学及免疫印迹(WesternBlot)检测损伤节段脊髓组织中GAP-43蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测大鼠脊髓损伤区GAP-43mRNA的表达情况。结果:1.rTSMS对急性脊髓损伤大鼠运动功能的影响(1)BBB评分在造模前1d所有大鼠的BBB评分均为21分。E组大鼠因未损伤脊髓,术后BBB评分下降不明显,术后各时间点,E组

6、BBB评分显著高于其余各组,差异具有统计学意义(P<0.05);A、B、C、D四组大鼠SCI后,BBB评分迅速降为0~2分,爬行过程中均表现为典型的截瘫体征,无可见的后肢运动。随着时间延长,BBB评分呈现逐渐上升的趋势。A组和B组比较,术后各时间点,BBB评分虽有差异,但并没有统计学意义(P>0.05)。术后1d和1周,大鼠运动功能1成都中医药大学硕士学位论文开始恢复,但并不明显,与D组比较,A、B、C三组大鼠BBB评分虽略高,但差异并无统计学意义(P>0.05),且A、B、C三组比较,差异也均无统计学意义(P>0.05)

7、;术后2、4、6、8周,A组和B组的BBB评分均显著高于D组(P<0.05);术后4、6、8周,C组BBB评分明显高于D组(P<0.05);术后4周A组和B组BBB评分均高于C组(P<0.05);而随着实验进入术后6周,直至术后8周,C组BBB评分均高于A组和B组(P<0.05)。(2)透射电镜观察A组:部分髓鞘出现松散的层状结构,肿胀膨大,髓鞘结构改变,轻度脱髓鞘。B组:髓鞘间形成较大间隙,髓鞘肿胀膨大,结构改变明显,髓鞘板层分离,神经细胞脱髓鞘。C组:松散的层状结构较少,髓鞘与轴突之间排列较致密,形状较规则,表现为轻度

8、脱髓鞘。D组:髓鞘间形成巨大间隙,髓鞘肿胀膨大,结构紊乱,正常结构的轴突基本消失,部分髓鞘崩解、断裂、脱失,脱髓鞘严重。E组:髓鞘结构完整、清晰;线粒体分布均匀,结构清晰。2.rTSMS对急性脊髓损伤大鼠GAP-43表达的影响(1)免疫组织化学检测脊髓损伤8周后,A、B、C、D组损伤区脊髓神经元胞浆中均

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