cd151对人结肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122356HebeiMedicalUniversity士学位论文科学学位CD151对人结肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究研究生：吴明发导师：张振亚教授于跃明教授专业：外科学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。

2、否则，承担相应法律责任。*、-•••..*-••••..im研究生签名：^师签章f卷於參院领导盖_1义.“反年，月7汨河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名导师签章Pi中>3日V目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文CD151对人结肠癌

3、干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33综述肿瘤干细胞的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48中文摘要CD151对人结肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究摘要目的：本研究拟用筛选后的人结肠癌干细胞，建立裸鼠移植瘤模型。在细胞水平和整体动物水平上，探讨在人结肠癌干细胞裸鼠成瘤模型中CD151基因对Wnt信号转导通路的作用影响。方法:1运用细胞培养技术对HT29细胞系及被敲除CD151的HT29细胞系++在含有血清的培养基中进行贴壁培养，对CD133CD44结肠癌干细胞和++敲除CD151的CD133CD44结肠癌干细胞在无血清培养基中进行悬浮培养,观察细胞的生长状况，

5、获取足量对数生长期的结肠癌干细胞及普通结肠癌细胞,并通过含有血清的培养基对结肠癌干细胞进行诱导分化来鉴定结肠癌干细胞。2运用激光共聚焦显微镜检测HT29细胞组和敲除CD151的HT29细胞组中CD44蛋白和CD133蛋白的荧光表达情况。3裸鼠皮下移植瘤模型的构建：将HT29细胞和敲除CD151的HT29++细胞及其分选后的两种CD133CD44的结肠癌干细胞分别接种于裸鼠皮下，观察其成瘤情况及进行病理学检查。++4采用实时荧光定量RT-PCR技术检测两组CD133CD44的结肠癌干细的裸鼠移植瘤中Wnt-5amRNA、β-cateninmRNA的表达。结果：1HT29细胞和敲除CD15

6、1的HT29细胞在含有血清的培养基中贴壁+++生长状况良好，CD133CD44结肠癌干细胞和敲除CD151的CD133+CD44结肠癌干细胞在无血清培养基中呈球状悬浮生长，生长状况良好。肿瘤干细胞球通过含有血清的培养基培养，在其诱导分化后均贴壁生长。2激光共聚焦显微镜检测到HT29细胞组CD44蛋白、CD133蛋白的荧光强度明显高于敲除CD151的HT29细胞组。++3CD133CD44结肠癌干细胞组的裸鼠成瘤率、瘤体体积、恶性程度++均高于HT29细胞组和敲除CD151的CD133CD44结肠癌干细胞组。1中文摘要++4应用实时荧光定量的RT-PCR技术检测到CD133CD44结肠癌

7、干细胞所形成的裸鼠移植瘤中Wnt-5amRNA、β-cateninmRNA的表达量明++显高于敲除CD151的CD133CD44结肠癌干细胞组。结论：1经CD133抗体和CD44抗体标记筛选的结肠癌干细胞有较强的增殖和侵袭能力；CD151基因缺失的HT29细胞中结肠癌干细胞特征性标记物CD44蛋白和CD133蛋白的表达较原株HT29细胞明显减少。2结肠癌干细胞组敲除CD151基因后可使与调节细胞增殖和分化功能密切相关的Wnt-5a和β-cate