klf4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

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1、授予单位代码10089学号或申请号13851HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义研究生：曾博文导师：李珅教授赵钗教授专业：外科学二级学院：石家庄市第一医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研宄所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科

2、大学，试验材料原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表和撰写的研宄成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。[rpg'oj研究生签名:导师签章：中文摘要KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义摘要膀胱癌在世界范围内有较高的发病率，在所有恶性肿瘤中排名第五位。同时膀胱肿瘤也是泌尿外科发病率及死亡率最高的恶

3、性肿瘤，其发病率逐年上升，严重威胁人类健康。超过95%的膀胱恶性肿瘤来源于尿路上皮细胞。膀胱癌根据其生长方式分为浅表性及浸润性生长，在所有膀胱癌病例中，大部分为腔内生长的浅表性肿瘤，目前广泛应用的治疗方式主要为经尿道膀胱肿瘤切除术，即使辅以膀胱灌注化疗，其复发率仍然很高。术后复查进展为浸润型膀胱癌的几率约为14~45%。手术治疗浸润性膀胱癌主要术式为膀胱部分切除及根治性肿瘤切除术，手术范围广，部分患者需终身携带造瘘管，严重影响患者生活质量。且术后复发率仍较高，约为50~70%，50%的患者术后4~5年

4、内死亡。因此膀胱癌的早期诊断对提高治疗效果降低肿瘤死亡率有重要意义。目的：本实验通过对正常膀胱粘膜组织及临床病理因素不同的膀胱尿路上皮癌组织标本进行研究，实验采用免疫组化SP法及免疫印记WesternBlotting法，测定KLF4在正常膀胱粘膜组织及不同临床病理因素膀胱尿路上皮癌组织中的表达情况，结果进行统计学分析，目的在于揭示KLF4蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达情况，及KLF4在膀胱癌发生、发展及不同临床病理因素之间的关系。方法：组织标本来源：收集2013年11月~2015年1月石家庄市第一医

5、院及解放军第260医院泌尿外科住院患者手术切除的51例膀胱癌组织及30例正常膀胱组织。51例膀胱癌组织均经病理证实为尿路上皮癌，根据2004年WHO膀胱癌分级标准，高级别21例，低级别30例，男性33例，女性18例，年龄24~79岁，平均年龄55.0岁。所有病例均为初次手术，术前未经任何放疗、化疗及免疫治疗。用于免疫组织化学SP法的标本（包括51例膀胱癌组织及30例正常膀胱粘膜组织）均经10%甲醛固定，固体石蜡包埋，4μm厚连续切片。用于免疫印记westernblotting法的标本（包括30例膀胱癌

6、组织及30例正常膀胱粘膜组织）于手术切除后立即于无菌条件下放入消毒后的Eppendof管内，放入液氮中运送至-70℃冰箱冻1中文摘要存备用。1免疫组织化学SP法（两步法）：应用免疫组化SP法检测51例膀胱尿路上皮癌组织和30例正常膀胱黏膜组织的锌指转录因子KLF4蛋白的表达情况。计算KLF4在正常膀胱黏膜组织及不同临床病理因素的膀胱尿路上皮癌组织的表达水平，制成表格并填充数据，应用SPSS19.0统计软件统计实验结果，比较KLF4在不同病理因素的膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱黏膜组织的表达情况，同时应用

7、统计学方法验证KLF4蛋白在膀2胱尿路上皮癌组织不同临床病理参数间的表达差异。以X检验统计实验结果，以P<0.05作为有显著统计学差异。2WesternBlotting检测:首先制备SDS-PAGE电泳凝胶，制备正常膀胱黏膜组织及膀胱尿路上皮癌组织标本，取上清液作为样品，进行蛋白含量测定。将KLF4蛋白样品按比例加入SDS上样缓冲液，100℃煮沸至蛋白变性，上样，室温60VSDS-PAGE稳压电泳持续3h。将蛋白转至PVDF膜。将PVDF膜置于5%脱脂奶粉封闭，进行一抗孵育及二抗孵育，最后用化学发光法

8、检测蛋白。用Westernblotting成像分析系统软件对结果进行定量分析。结果：免疫组化结果表明：KLF4在膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱粘膜组织中均有表达，KLF4大多呈弥漫失极性表达，呈棕黄色颗粒，位于胞质内，弥散分布，部分细胞出现胞核着色。KLF4在正常膀胱粘膜组织的阳性表达率为96.7%，在膀胱癌组织的阳性表达率为51.0%，KLF4在正常膀胱黏膜组织的表达强度明显高于膀胱尿路上皮癌组织。非浸润性膀胱癌组织的KLF4表达强度明显高于浸润性膀胱癌