mir-375在结直肠癌中的调控机制研究

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1、分类号密级公开编号嚷弟學碛士研究生嗲像铪夂题目在结直肠癌中的调控机制研究学院（所、中心）生命科学学院专业名称生物化学与分子生物学研究生姓名杨琴学号导师姓名崔清华职称教授二零一五年五月MasterDissertationResearchofmiR-375regulatorymechanismsincolorectalcancerLaboratoryofBiochemistry&MoleculeBiologySchoolofLifeScience，基金资助：国家自然科学基金（国家自然科学基金（扉页论文独创性声明及使用授权本论文是

2、作者在导师指导下取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保阐本论文（含电子版），也可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用丁学术规范审査、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的

3、论文在解密后应遵循此规定）日勒：云南大学硕士学位论文摘要结直肠癌（，是发生在大肠粘膜上皮的恶性肿瘤，近年来发病率和死亡率呈全球性上升。的早期诊断与治疗可显著提高生存率，因此寻找特异性的肿瘤标记物，及研究其发病机理有一定的现实意义。是生物体内源性非编码，与诸多恶性肿瘤的发生与迁移密切相关，具有作为肿瘤标记物及治疗靶标的潜力。在结直肠癌中，我们发现在肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织，但它是否参与结直肠癌的调控及其作用机制尚不清楚。因此，我们首先从多个数据库搜集的预测靶基因及其作用通路，筛选出、及信号途径。然后以结直肠癌细胞株，为

4、材料，通过基因程技术瞬时和稳定表达后，发现在分子水平上确实通过下调靶基因和，抑制了下游的和蛋白的磷酸化水平；但卯未通过靶标参与调控自噬途径。细胞增殖实验表明，在一定程度上抑制了细胞增殖及迁移能力；进一步的个体成瘤实验发现，注射空载体细胞的裸鼠在天形成肿瘤，且肿瘤体积随时间增大，而注射稳定表达的细胞的裸鼠在天均无肿瘤形成。综上所述，在结直肠癌中表达下调，并且通过和而非信号途径参与细胞的增殖和迁移。此结论为将作为结直肠癌的诊断标记及治疗的祀标分子，在临床应用上提供了一定的理论依据。关键词：结直肠癌；信号途径；信号途径云南大学硕士

5、学位论文，，：云南大学硕士学位论文缩略词对照表缩写英文全称中文全称结直肠癌诱导沉默复合体智人种微小激酶丝裂原活化蛋白激酶激酶信号转导和转录激活因子磷酸化丝裂原活化蛋白激酶胎牛血清磷酸缓冲液二甲基亚砜牛血清蛋白乙二胺四乙酸聚偏氟乙烯膜云南大学硕士学位论文目录缩略词对照表结直肠癌现状及诊断、与结直肠癌关系与肿瘤的发生与肿瘤的发生研究现状形成作用机制与肿瘤的关系与结直肠癌诊断与消化道癌症作用机制与靶基因与、通路研究的目的及意义第二章材料与方法实验材料细胞株：主要试剂耗材主要仪器实验方法瞬时过表达载体构建构建稳定转染细胞株检测调控的

6、蛋白变化对细胞增殖及迁移的影响划痕实验检测对细胞迁移增殖能力的影响裸鼠成瘤实验第三章结果与分析靶标基因分析结果载体的构建细胞基因组提取梯度扩增目的条带菌落检测片段连接测序结果云南大学硕士学位论文瞬时转染结果稳定高表达细胞株构建及检测检测蛋白水平法和细胞计数法检测细胞增殖划痕实验检测对细胞迁移能力的影响裸鼠成瘤实验第四章讨论第五章结论过表达载体及稳转细胞株的构建对信号通路的抑制对信号通路的抑制对细胞增殖能力的影响对细胞迁移增殖能力的影响抑制裸鼠的肿瘤形成附录一相关试剂配制方法附录二辦滅致谢云南大学硕士学位论文第一章前言结直肠痛

7、现状及诊断结直肠癌（，主要分为结肠癌和直肠癌，是常见的消化系统恶性肿瘤之一。在发达国家如北美，西欧，澳大利亚，新西兰等国，发病率高居第一位，死亡率第二。伴随人们生活水平提高，饮食的多样化及老龄化加快，结直肠癌发病率在我国也呈上升的趋势。年月日在上海举行的第九届上海国际大肠癌高峰论坛报道指出，在中国许多大中型城市，结直肠癌发病率由上世纪年代初的万增长到目前的万，增速约每年，远超的国际水平，结直肠癌已位居消化道恶性肿瘤第一位⑴。由于中国人口基数大，近年来结直肠癌发病和死亡数已经超过美国，且发病呈年轻化趋势，大多数患者确诊时已经是

8、晚期。结直肠癌晚期的肝转移是患者死亡的最主要原因，早期的诊断和治疗可明显提高其生存率。调查显示，晚期和转移性患者的总生存率仅为而早期结肠癌患者年生存率约为。目前结直肠癌的检查手段主要包括：①直肠指诊，多用于直肠癌下段的触及检测，但检查范围十分有限。②结直肠镜检，对于大的结直肠病灶有良好的敏